[发明专利]一种流感病毒亚单位疫苗纯化方法及其应用

说明书

本发明提供了一种含有四步纯化工艺的流感病毒亚单位疫苗的制备方法和由所述方法制备得到的疫苗，本发明提供的流感病毒亚单位疫苗四步纯化工艺，弥补了现有技术中三步纯化工艺的不足，既降低了疫苗中卵清蛋白的含量，又增强了病毒裂解效果，提高了HA等有效抗原物质的含量。

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种流感疫苗的制备方法及利用该方法制备得到的疫苗。

背景技术

流行性感冒病毒(influenza virus，简称流感病毒)，是一种引起人、禽、畜共患的急性呼吸道传染病。根据病毒表面血凝素和神经氨酸酶结构及其基因特性的不同分为许多亚型，目前已发现的血凝素有16个亚型(H1～H16)，神经氨酸酶有10个亚型(N1～N10)。

接种流感疫苗是预防流感发生与传播的最佳方法。流感病毒亚单位疫苗是用裂解剂将病毒裂解而制得，疫苗中含有血凝素/神经氨酸酶表面抗原和其它抗原，病毒包膜被破坏，脂质被去除，具有较高的免疫原性，副反应较低，可用于儿童、成人和老年人。

在目前的流感病毒亚单位疫苗生产中，纯化工艺一般包括三步：流感病毒裂解前纯化、流感病毒裂解后纯化和最终的洗滤纯化，或者是，流感病毒裂解时纯化、裂解后纯化和最终洗滤纯化，只注重病毒裂解前的纯化而忽略了裂解过程中的纯化，虽然降低卵清蛋白等杂质，但是忽略了使裂解剂与病毒充分接触，从而影响了病毒裂解效果，同时因为无法使裂解下来的HA和NA进入到相应密度的蔗糖区间，进而无法在裂解时对HA和NA起到富集和纯化作用；只注重病毒裂解过程中的纯化而忽略了裂解前的纯化，虽然增强了流感病毒的裂解效果和裂解过程中对有效抗原物质HA和NA的富集、纯化作用，但是忽略了对卵清蛋白等杂质的进一步去除。例如，在现有技术CN102068692A、CN103520716A、CN106668854A中公开了的流感裂解疫苗制备方法中，采用的是流感病毒裂解前纯化、流感病毒裂解后纯化和最终的洗滤纯化，现有技术CN104888212A中公开了的流感裂解疫苗制备方法中，采用了流感病毒裂解时纯化、裂解后纯化和最终洗滤纯化的纯化方式。通过三步纯化工艺能够大大降低流感病毒亚单位疫苗中的卵清蛋白、裂解剂和甲醛等杂质的含量，减少不良反应的发生，提高疫苗的安全性。但是疫苗中的卵清蛋白等杂质不可能完全去除，因而，需要在研发过程中不断改进工艺方法，尽可能的降低杂质的含量，提高有效抗原物质含量，不断提高产品的安全性和有效性。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供了一种可以降低杂质和提高有效抗原物质的流感疫苗制备方法。

本发明提供了一种流感疫苗制备方法，所述的制备方法采用了四步纯化工艺。

一种制备流感病毒亚单位疫苗的方法，所述方法的步骤包括：

(1)病毒的增殖、浓缩；(2)病毒裂解前纯化；(3)病毒的裂解；(4)裂解液的纯化；(5)裂解液的灭活；(6)灭活液的洗滤纯化。

所述的步骤(2)病毒裂解前纯化所用方法为密度梯度离心法；

所述的步骤(3)病毒的裂解为病毒裂解与蔗糖密度梯度离心同时进行。

优选的，所述的步骤(2)病毒裂解前纯化中包括：1)制作蔗糖密度梯度；2)上样与离心；3)加入液体进行循环；4)收集目标液。

具体的，所述的步骤(2)病毒裂解前纯化中包括：

1)配制蔗糖浓度梯度溶液，启动超速离心机，抽真空，排气泡，制作蔗糖密度梯度；

2)加入病毒浓缩液，同时，对病毒浓缩液进行离心；

3)病毒浓缩液加完后，加入液体进行循环；

4)收集目标液。

在本发明的具体实施例中，所述的步骤(2)病毒裂解前纯化中包括：