[发明专利]一种用于鉴定不结球白菜苏州青、矮脚黄、乌塌菜的分子标记方法

摘要

本发明提供了一种用于鉴定不结球白菜苏州青、矮脚黄、乌塌菜的分子标记方法，设计了SSR分子标记引物SSR09133，以不结球白菜的DNA作为模板进行扩增，可以将未知品种的不结球白菜与苏州青、矮脚黄、乌塌菜三个品种区分开来。本方法不受植株生长发育阶段和环境的影响，具有准确性高、重复性好、操作简单、耗时短的优点，具有较高的商业应用前景，值得大范围推广。

主权项

1.一种不结球白菜的SSR分子标记引物，其特征在于：其序列为：

SSR09133‑F：5’‑CTGACGGCAACCATAGAAGA‑3’，

SSR09133‑R：5’‑ACAGTCGTGAGGTTCCCTTT‑3’。

2.利用权利要求1所述的引物鉴定不结球白菜的分子标记方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1，提取待鉴定不结球白菜的DNA；

步骤2，以步骤1提取的DNA作为模板，用上述引物对其进行PCR扩增；

步骤3，对步骤2的PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；

结果判断标准如下：检测的产物条带与苏州青、矮脚黄、乌塌菜中的一个条带一致，并且与其他两个条带存在多态性，则证明该检测样本与条带一致的品种为同一品种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤2中的PCR扩增体系包括：2× Taq MasterMix、10μM正向SSR引物、10μM反向SSR引物、50ng/μL DNA模板、去离子水。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤2中的PCR扩增体系为10μL扩增体系，具体包括：2× Taq MasterMix 5μL、10μM正向SSR引物 1μL、10μM反向SSR引物 1μL、50ng/μL DNA模板 1μL、去离子水2μL。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤2中PCR扩增程序为94℃预变性5min，然后94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min20s，共28个循环，最后72℃延伸7min，4℃保存。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤3中采用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测。

7.权利要求1所述的引物在不结球白菜苏州青、矮脚黄、乌塌菜鉴定中的应用。