[发明专利]一种解酒护肝的复合微生物饮品及其制备方法

摘要

本发明提供一种复合微生物活菌含量高、活性高、稳定性高、作用效果快的、无副作用，保存时间长，具有明显保肝护肝，解酒的复合微生物饮品，制备该复合微生物饮品的原料按重量份由枯草芽孢杆菌发酵液30‑40份，桃红荚硫菌发酵液30‑40份，米根霉发酵液30‑40份混合而成。本发明所选择的菌株都是经过解酒与乙醇保持率的试验筛选的，较高的乙醇保持率能够抑制乙醇在胃肠道的吸收并加速乙醇在胃内的代谢，从而降低血液中乙醇的浓度；复合微生物饮品含有丰富的聚谷氨酸，多肽，多糖物质以及益生菌，可以有效降低血清ALT,AST的水平，防治酒精性肝损伤并且可提高肝脏抗氧化能力来减少肝损伤。

主权项

1.一种解酒护肝的复合微生物饮品，其特征在于，该复合微生物饮品由枯草芽孢杆菌发酵液30-40份，桃红荚硫菌发酵液30-40份，米根霉发酵液30-40份混合而成；该复合微生物饮品具体的制备方法，包括以下步骤：步骤一, 枯草芽孢杆菌发酵液的制备、取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装液量为2L LB培养基的5L大三角瓶中， 37℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，活菌含量超过30亿/毫升，即可作为枯草芽孢杆菌液体菌种；、将步骤培养的枯草芽孢杆菌液体菌种作为种子，接种至600L发酵培养基，接种量为10%，开搅拌120r/min，每分钟通气量液气比1：0.8，37℃培养24-36小时，待芽孢含量不低于100亿/毫升，即可结束发酵，作为枯草芽孢杆菌发酵液；其中，所述LB培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2%；其中，所述发酵培养基：玉米黄粉40 g/L，葡萄糖10g/L，葛根粉40 g/L， 蛋白胨8 g/L，硫酸镁0.3 g/L，硫酸锰0.2 g/L，磷酸二氢钠0.5 g/L，磷酸氢二钠2.3 g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；其中，所述的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）JCD-H-16，该菌种已由本发明的专利权人在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO．13663保藏日期为2017年2月16日；步骤二，桃红荚硫菌发酵液的制备、半固体种子活化培养：将桃红荚硫菌种穿刺在半固体紫硫光合细菌培养基中，25-35℃光照培养7-10天，待穿刺的菌线变红并长出菌苔，即可为活化的菌种、种子培养：将活化的菌种接种至种子液体培养基中，温度25-35℃，光照强度为：1000-3000lux，光照厌氧培养7-10天，检测种子的OD650≥1.2，活菌数≥6亿cfu/ml即为种子培养液；、发酵培养：将种子培养液与桃红荚硫菌发酵培养基以1：4的接种量接种，在光照培养罐中厌氧培养7-10天，培养温度25-35℃，光照强度为：1000-4000lux，搅拌速度为50转/分钟，待检测其OD650≥4，活菌数≥10亿cfu/ml，多糖含量达到5 g/L，即为桃红荚硫菌发酵液；其中，所述的半固体紫硫光合细菌培养基为：氯化铵0.6g/L，磷酸二氢钾0.6g/L，二水氯化钙0.08g/L，氯化镁0.3g/L，果糖2g/L，醋酸钠2 g/L，苹果酸钠1g/L，九水硫化钠0.2g/L，琼脂10g/L，121℃灭菌15分钟，用醋酸调PH至7.0-7.2，其中九水硫化钠先配制成0.1g/mL单独灭菌；其中，所述的种子液体培养基为：氯化铵0.6g/L，磷酸二氢钾0.8g/L，二水氯化钙0.05g/L，氯化镁0.3g/L，果糖2g/L，醋酸钠2 g/L，甘油0.5g/L，九水硫化钠0.2g/L，121℃灭菌15分钟，用醋酸调PH至7.0-7.2，其中九水硫化钠先配制成0.1g/mL单独灭菌；其中，所述的桃红荚硫菌发酵培养基为：玉米黄粉20 g/L，氯化铵0.5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，二水氯化钙0.1g/L，氯化镁0.4g/L，果糖20g/L，醋酸钠2 g/L，蜂蜜10g/L，硫代硫酸钠1g/L，121℃灭菌15分钟，用醋酸调PH至7.0-7.2；其中，桃红荚硫菌由本发明人保藏在中国普通微生物菌种管理中心，编号为CGMCC10344，保藏日期为2015年1月12日；步骤三，米根霉发酵液的制备、取出米根霉菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，28℃培养5天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中28℃培养5-7天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为1亿cfu/ml，即为米根霉种子液；发酵：将上述制备的米根霉种子液以2%的接种量接种至装有300L米根霉发酵培养基的500L发酵罐中，开搅拌200r/min，前8小时通气量为120L/min，8-24小时后通气量为240L/min ，24小时后通气量为360L/min ，30℃培养48-72小时，待菌体含量达到60g/L，即可停罐，即可作为米根霉发酵液；其中，所述的PDA固体培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；其中，所述的米根霉发酵培养基：玉米黄粉40 g/L，葡萄糖10g/L，葛根粉40 g/L，大豆分离蛋白粉10 g/L，硫酸镁0.3 g/L，硫酸锰0.2 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L， pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；其中，米根霉菌种是购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，编号为CGMCC 3.5085； 步骤四，将前面制备的枯草芽孢杆菌发酵液30-40份，桃红荚硫菌发酵液30-40份，米根霉发酵液30-40份混合而成 ，检测其多糖含量不低于1.5 g/L，芽孢含量不低于20亿CFU/ml，即可灌装，作为复合微生物饮品。