[发明专利]一种蜕膜间充质干细胞的制备方法

摘要

本发明公开了一种蜕膜间充质干细胞的制备方法：步骤1、分离；步骤2、初处理；步骤3、过滤；步骤4、接种和培养；步骤5、传代；步骤6、细胞冻存；步骤7；细胞复苏。本发明拟从原料采集开始直至细胞制备完成的全过程进行统一、系统监控，从胎盘采集前的筛选开始直至细胞制备成成品中间品及终产品的质量全部受控。

主权项

1.一种蜕膜间充质干细胞的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：步骤1：分离：将胎盘组织用无菌盐水冲洗后，小心分离脐带和胎盘底蜕膜组织，将脐带和底蜕膜组织分开操作；步骤2：初处理：分别将步骤1中的脐带和胎盘底蜕膜组织剪成小组织块，洗去两者中的血液成分，再加入胶原酶和胰酶消化小组织块。步骤3：过滤：将消化后得到的混合液体经过滤网过滤掉不溶物质。步骤4：接种和培养：将过滤后的混合液体分别接种于细胞培养瓶中，用含胎牛血清的DF12培养液于37℃、3～8％CO2、饱和湿度的培养箱中培养。步骤5：传代：待细胞生长至70～85％融合时，加入胰酶消化细胞，进行传代。步骤6：细胞冻存：收集细胞并计数和活率，按3×107/ml/管放入细胞冻存管，加入冷冻保护液，放入液氮罐中进行冷冻保存；步骤7：细胞复苏：将细胞冻存管从液氮罐中取出，迅速放入37℃水浴中，不断摇动，2min中之内解冻，离心洗涤弃上清，获得蜕膜间充质干细胞，按照需求使用即可。