[发明专利]一种脱落酸的免疫PCR测定方法在审
| 申请号： | 201711375741.8 | 申请日： | 2017-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN108085365A | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 肖浪涛;苏益;李维;黄志刚;王若仲 | 申请（专利权）人： | 湖南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6804 | 分类号： | C12Q1/6804 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 伍传松 |
| 地址： | 410128 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明属于植物激素测定领域，提供了一种脱落酸的免疫PCR测定方法，步骤包括：用戊二醛对PCR管/板的内表面进行预处理，用抗脱落酸单抗体包被处理后的PCR管/板表面，合成探针混合物，加入处理后的PCR管/板中，再加入待测脱落酸样品至PCR管/板中进行反应，在实时PCR设备中进行扩增，根据扩增结果，确定脱落酸含量。对比试验表明，利用戊二醛对PCR管/板的内表面进行预处理，可提高20～30％的抗体包被能力，本发明还使用了生物素化ABA多抗、生物素化DNA和亲和素三种物质合成探针混合物，提高了ABA测定的可重复性，本发明的免疫PCR法检测下限可以达到10ng/L，接近液质联用的检测结果，解决了生物体外植物激素难以和生物大分子直接反应的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 脱落酸 免疫PCR 预处理 合成探针 抗体包被 生物素化 植物激素 混合物 内表面 戊二醛 扩增 生物大分子 生物体 对比试验 检测结果 可重复性 液质联用 直接反应 实时PCR 板表面 检测 | ||
【主权项】：
1.一种脱落酸的免疫PCR测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用戊二醛对PCR管/板的内表面进行预处理，然后用缓冲液冲洗去除残留的戊二醛；(2)用抗脱落酸单抗体包被步骤(1)处理后的PCR管/板表面，包被完成后使用蛋白液封闭；(3)合成探针混合物，加入步骤(2)处理后的PCR管/板中；(4)加入待测脱落酸样品至步骤(3)中的PCR管/板，反应后移除管/板中液体；(5)加入特异性引物、PCR试剂盒混合物和水到步骤(4)处理的PCR管/板中，在实时PCR设备中进行扩增；(6)根据PCR扩增的结果，确定脱落酸含量。
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