[发明专利]诱导型酵母转化重组系统的构建及其应用

摘要

本发明公开了一种诱导型酵母转化重组系统的构建及其在大片段DNA捕捉中的应用。所述的iTAR载体含有PGal1‑V10、I‑SceI、BleR、CEN6、ARSH4、URA3、同源臂1、同源臂2及同源臂间的I‑SceI酶切位点。iTAR载体可以通过半乳糖诱导Gal1‑V10启动子，产生I‑SceI酶，作用于I‑SceI酶切位点，使iTAR载体自身线性化，将大片段DNA转化到含iTAR载体的酿酒酵母中，实现空载体的降解和酵母体内的同源重组，达到克隆大片段DNA的目的。本发明的iTAR克隆方法简单、高效，能够快速、准确地从基因组中获得所需要的大片段DNA而无酶切位点的限制，转化效率可达73％左右。

主权项

1.重组载体pSHTB10，其特征在于，为将质粒pSH-SceI中的colE1、AmpR和PGal1基因元件替换成pSWB中的oriV、trfA和BleR DNA片段和Gal1-V10 DNA合成片段，形成全长序列为SEQID NO.32的质粒pSHTB10；所述的质粒pSH-SceI是将质粒pSH47中的Cre元件替换成I-SceI基因片段；所述的质粒pSWB是将质粒pDGICZ中的Phbs-BleR基因元件插入到质粒pSW-2中。