[发明专利]以碳点为光活性模拟酶的酸性磷酸酶测定方法

摘要

以碳点为光活性模拟酶的酸性磷酸酶测定方法。本发明提供了一种基于碳量子点的光活性模拟酶并发现其在Ce3+/PO43‑存在下模拟酶的活性发生抑制/恢复，从而建立了一种新型的检测酸性磷酸酶(ACP)的方法。采用简单的水热方法合成了碳量子点，其在可见光(λ≥400nm)下体现了较高的模拟酶活性，可以催化氧化3,3’,5,5’―四甲基联苯胺的显色反应。Ce3+与CDs表面的羧基发生络合反应导致其聚集而催化活性减弱；在ACP的水解产物磷酸根离子的存在下，Ce3+形成沉淀从而其对CDs的模拟酶抑制作用消除，体系的类酶催化活性恢复。本发明所建立的检测ACP活性的检测限可达0.02U/L，具有使用方便、灵敏度高、选择性好等优点。 1

主权项

1.以碳点为光活性模拟酶的酸性磷酸酶测定方法，其特征在于：

a、碳量子点的制备：在100mL烧杯中，加入一定量的含碳元素的原材料和25mL的按照一定比例混合的2.0mol/L硫酸与2.0mol/L硝酸的混合溶液，在不断搅拌的情况下形成溶液；取20mL的混合物加入到反应釜中，在一定温度下加热反应一段时间，自然冷却到室温后，缓慢加入80mL的去离子水，然后用1.0mol/L的NaOH溶液调节溶液的pH至中性；得到的溶液用透析袋透析3天，得到水溶性的碳量子点；

b、酸性磷酸酶活性的测定：取10μL不同浓度的酸性磷酸酶与10μL 1.0mmol/L酸性磷酸酶的底物与30μL的pH＝5.0的醋酸缓冲溶液混合，于96孔板中40℃下震荡孵育2h；随后加入30μL CDs，20μL 5mmol/L 3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺，使用0.2mol/L pH＝3.0的醋酸缓冲溶液将反应液稀释到200μL；混合均匀后置于可见光下(λ≥400nm)照射15min后，用酶标仪检测体系652nm处的吸光度。

2.根据权利要求1所述的以碳点为光活性模拟酶的酸性磷酸酶测定方法，其特征在于所述的含碳元素的原材料选自活性炭、抗坏血酸和柠檬酸三钠，质量为0.1‑0.5g。

3.根据权利要求1所述的以碳点为光活性模拟酶的酸性磷酸酶测定方法，其特征在于所述的按照一定比例混合的2.0mol/L硫酸与2.0mol/L硝酸的混合溶液，硫酸与硝酸的体积比为1:1‑4:1。

4.根据权利要求1所述的以碳点为光活性模拟酶的酸性磷酸酶测定方法，其特征在于所述的合成碳点的反应温度为60‑120度，反应时间为3h‑6h。

5.根据权利要求1所述的以碳点为光活性模拟酶的酸性磷酸酶测定方法，其特征在于所述的酸性磷酸酶的底物为焦磷酸钠、o‑磷酸基‑L‑酪氨酸。