[发明专利]一种嗜热L-天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法有效

专利信息
申请号: 201711354028.5 申请日: 2017-12-15
公开(公告)号: CN108103049B 公开(公告)日: 2020-08-04
发明(设计)人: 饶志明;李谞;张显;徐书琴;胡静宜;徐美娟;杨套伟 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12N9/82 分类号: C12N9/82;C12N15/55;C12N15/70;C12N15/75;C12N15/81
代理公司: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 代理人: 张勇
地址: 214122 江*** 国省代码: 江苏;32
权利要求书: 暂无信息 说明书: 暂无信息
摘要: 发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法,属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中,以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板,以易错PCR技术构建突变文库,并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法,筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基,构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A,其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段,提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵,L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。
搜索关键词: 一种 天冬 酰胺酶 突变体 及其 筛选 发酵 方法
【主权项】:
1.一种嗜热L-天冬酰胺酶突变体,所述突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9。
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