[发明专利]一种酶法转化生产9α-羟基雄甾-4-烯-3;17-二酮的方法有效
| 申请号： | 201711352434.8 | 申请日： | 2017-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN107955827B | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;沙宗焱;张显;杨套伟;徐美娟 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12P33/06 | 分类号： | C12P33/06;C12N9/02;C12N15/70 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种酶法转化生产9α‑羟基雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明将来源于Mycobacterium sp.Strain VKMAc‑1817D的3‑甾酮9α‑羟基化酶的氧化亚基KshA，还原亚基KshB，及未知活性亚基KshC成功在E.coliBL21中表达，并鉴定出KshC为氧化亚基，且酶活远高于KshA。利用本实验室已构建的BL21/pET‑28a(+)‑fdh表达甲酸脱氢酶FDH，以KSH(KshB+KshC)和FDH工程菌的粗酶液作为生物催化剂，以甾体化合物AD为底物，同时确定了最佳反应温度为30℃，pH7.0。在最优条件下转化AD生成产物9‑OH‑AD，在20小时内，9‑OH‑AD的产量为4.7g/L，摩尔转化率达到96.7％。本发明产生9‑OH‑AD实现了3‑甾酮9α‑羟基化酶羟化系统与辅酶循环体系的偶联，具有效率高，成本低，绿色环保等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 转化 生产 羟基 17 方法 | ||
【主权项】：
1.一种转化雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮生成9α‑羟基雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮的组合物，其特征在于，所述组合物包括由3‑甾酮9α‑羟基化酶还原亚基KshB和3‑甾酮9α‑羟基化酶氧化亚基KshC组成的3‑甾酮9α‑羟基化酶混合酶液；编码所述3‑甾酮9α‑羟基化酶还原亚基KshB的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；编码所述3‑甾酮9α‑羟基化酶氧化亚基KshC的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
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