[发明专利]一种酶法转化生产9α-羟基雄甾-4-烯-3;17-二酮的方法有效
| 申请号： | 201711352434.8 | 申请日： | 2017-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN107955827B | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;沙宗焱;张显;杨套伟;徐美娟 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12P33/06 | 分类号： | C12P33/06;C12N9/02;C12N15/70 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转化 生产 羟基 17 方法 | ||
1.一种转化雄甾-4-烯-3,17-二酮生成9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮的组合物，其特征在于，所述组合物包括由3-甾酮9α-羟基化酶还原亚基KshB和3-甾酮9α-羟基化酶氧化亚基KshC组成的3-甾酮9α-羟基化酶混合酶液；编码所述3-甾酮9α-羟基化酶还原亚基KshB的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；编码所述3-甾酮9α-羟基化酶氧化亚基KshC的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括辅酶NAD+、NADH、甲酸脱氢酶或三者的任意组合。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述3-甾酮9α-羟基化酶还原亚基KshB的氨基酸序列为SEQ ID NO.4。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述3-甾酮9α-羟基化酶氧化亚基KshC的氨基酸序列为SEQ ID NO.5。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物为由3-甾酮9α-羟基化酶还原亚基KshB和3-甾酮9α-羟基化酶氧化亚基KshC组成的3-甾酮9α-羟基化酶混合酶液、NADH和甲酸脱氢酶组成。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述3-甾酮9α-羟基化酶氧化亚基KshC、3-甾酮9α-羟基化酶还原亚基KshB与甲酸脱氢酶按酶活添加比例为1～10:1～10:1～10。
7.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述NADH的添加量为0.01～1mol/L。
8.权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征在于，所述方法具体是：
(1)以SEQ ID NO.2所示核酸序列为模板，扩增得到编码3-甾酮9α-羟基化酶还原亚基KshB的基因，将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a上，获得重组质粒pET-28a-kshB；
(2)以SEQ ID NO.3所示核酸序列为模板，扩增得到编码3-甾酮9α-羟基化酶氧化亚基KshC的基因，将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-Duet1(+)上，获得重组质粒pET-Duet1(+)-kshC；
(3)将步骤(1)和步骤(2)的重组质粒分别转化至大肠杆菌中获得重组大肠杆菌BL21/pET-28a(+)-kshB和BL21/pET-Duet1(+)-kshC；
(4)利用步骤(3)的重组大肠杆菌发酵获得3-甾酮9α-羟基化酶还原亚基KshB和3-甾酮9α-羟基化酶氧化亚基KshC组成的3-甾酮9α-羟基化酶混合酶液。
9.一种提高雄甾-4-烯-3,17-二酮转化生成9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮效率的方法，所述方法是利用权利要求1所述的组合物作为催化剂，进行生物转化。
10.权利要求1所述的组合物在生产甾体化合物领域的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学，未经江南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201711352434.8/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
