[发明专利]一种大肠杆菌的发酵培养方法及其在饲料添加剂中的应用

摘要

本发明提供了一种大肠杆菌Escherichia coli Nissle 1917的发酵培养方法。在发酵过程初期控制葡萄糖流加量，后期采用蔗糖作为碳源的补充，降低了发酵后期抑制菌体生长乙酸的积累量，同时与优化的培养基和发酵条件相配合提高了活菌体数量，且批次间重复性稳定，有利于生产化工业控制。本发明还提供了以上述发酵培养方法所得大肠杆菌EcN为原料的饲料添加剂的制备方法，将赖氨酸盐酸盐、蛋氨酸、苏氨酸、甜味料和大肠杆菌EcN与水加热混匀后，得到饲料添加剂；通过各原料之间的协同作用，使得制得的饲料添加剂中的营养成分均匀，使用效果好，同时用于制备该添加剂的方法简单、原料易得。

主权项

1.一种大肠杆菌的发酵培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)菌种活化：将菌保管从-80℃超低温冷冻存储箱取出，待其解冻后吸取少量大肠杆菌Nissle 1917菌液划线于LB平板上，倒置于37℃恒温箱内过夜培养；(2)摇瓶种子培养：挑取平板上的单菌落于LB液体培养基中，37℃培养4～5小时，摇床转速200rpm，OD600值为1.5～2.0；(3)发酵培养：将摇瓶种子液移入装有发酵培养基的发酵罐中进行扩大培养，接种量为0.67％，培养周期为16小时，OD600为42，湿重6.08g/100mL，干重2.125g/100mL，活细胞数5.67×1013CFU/mL；在发酵初期3小时、5小时分别流加占培养基体积分数2％的混合流加液Ⅰ，7小时、9小时、11小时、15小时分别流加占培养基体积分数2％的混合流加液Ⅱ。