[发明专利]调节性T细胞体外扩增方法

摘要

本发明公开一种调节性T细胞体外扩增方法，主要包括：分离，从血液样品中先分离出CD4+CD127low T细胞，再从CD4+CD127low T细胞中分离出CD4+CD25+CD127low Treg细胞；激活细胞，将分离出的CD4+CD25+CD127low Treg细胞悬浮于培养基RPMI1640+10％FBS中，加入3‑8倍细胞数量的CD3/CD28MACS磁珠，将细胞放于培养板中并加入500U/mL人重组IL‑2，培养；扩增与培养细胞，细胞中加入500U/ml人重组IL‑2，继续培养；然后将细胞传代，继续加入500U/ml人重组IL‑2培养；收集所有细胞，离心去除培养基，将细胞与细胞培养基加入到6孔板中培养2‑3天；之后再次离心，将细胞与细胞培养基加入到细胞培养瓶中进行培养，每2‑3天换液一次，从细胞激活开始总共培养14‑22天，收集所有细胞。本发明的方法能够有效促进调节性T细胞的增殖，并确保扩增后调节性T细胞的纯度和功能。

主权项

1.一种调节性T细胞体外扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：分离，从血液样品中直接分离出CD4+CD127low T细胞，再从CD4+CD127low T细胞中分离出CD25+T细胞，即获得CD4+CD25+CD127low Treg细胞；第二步：激活细胞，将分离出的CD4+CD25+CD127low Treg细胞悬浮于培养基RPMI1640+10％FBS中，加入3-8倍细胞数量的CD3/CD28MACS磁珠，将细胞按照每孔0.5～1×105放于培养板中，并加入终浓度500U/mL人重组IL-2，置于细胞培养箱培养12-20小时；第三步：扩增与培养细胞，在第二步的细胞中加入终浓度500U/ml人重组IL-2，混合均匀，继续放入细胞培养箱中培养2-3天；然后按照培养板每孔1×105将细胞传代，继续加入终浓度500U/ml人重组IL-2，培养2-3天；收集所有细胞，离心去除培养基，将细胞与混有500U/ml人重组IL-2的细胞培养基PRMI1640+10％FBS加入到6孔板中，培养2-3天；之后再次离心去除培养基，将细胞与混有500U/ml人重组IL-2的细胞培养基PRMI1640+10％FBS加入到细胞培养瓶中进行培养，每2-3天使用相同组分的细胞培养基换液一次，直至从细胞激活开始总共培养14-22天，之后收集所有细胞。