[发明专利]基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法及试剂盒和应用

摘要

本发明公开了一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法及试剂盒和应用，检测方法灵敏、准确、快速、特异性强，还能搭配全自动化学发光免疫分析仪实现大批量样本的全自动检测。所述试剂盒组成成分包括：磁微球、MPA抗体工作液、吖啶酯标记物工作液、MPA标准品、底物液1、底物液2、浓缩提取液和浓缩洗涤液。本发明试剂盒的分析灵敏度为：0.057ppb；IC50为0.48ppb；精密性：分析内的变异系数（CV%）不大于8%，分析间的变异系数（CV%）不大于8%；准确度通过回收率实验进行测定，回收率为85%～120%之间；线性相关系数|r|不小于0.9800。

主权项

1.一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法，其特征在于，是在磁微球上包被有羊抗鼠多克隆抗体，依次加入MPA单克隆抗体工作液、样品或标准品及吖啶酯标记MPA抗原后，样品或标准品中的MPA与吖啶酯标记的MPA抗原在液相环境中竞争结合到MPA单克隆抗体上，同时MPA单克隆抗体被分散在液相中磁微球吸附下来，形成了磁微球‑MPA抗体‑MPA或磁微球‑MPA抗体‑MPA抗原‑吖啶酯的免疫复合物，经底物液1和底物液2的酸碱化学反应，即可测量化学发光反应的相对光单位（RLU/s，以下简称RLU值）；样品或标准品中MPA的含量和光学系统所测量出的相对光单位（RLU/s）成反比关系，通过标准曲线拟合，测定样品中MPA的残留量；其中，磁微球上包被羊抗鼠多克隆抗体的方法是取清洗好的磁微球，加入Binding Buffer后混匀，然后加入Coupling Reagent溶液旋转活化反应，再加入经过Binding Buffer超滤纯化的羊抗鼠多克隆抗体进行旋转反应，反应后用洗涤液清洗磁微球即得；底物液1为0.1%～1%（w/v）过氧化氢，0.02% Tween‑20，0.05% TritonX‑100；底物液2为pH值为9～12的氢氧化钠。