[发明专利]基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法及试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法及试剂盒和应用，检测方法灵敏、准确、快速、特异性强，还能搭配全自动化学发光免疫分析仪实现大批量样本的全自动检测。所述试剂盒组成成分包括：磁微球、MPA抗体工作液、吖啶酯标记物工作液、MPA标准品、底物液1、底物液2、浓缩提取液和浓缩洗涤液。本发明试剂盒的分析灵敏度为：0.057ppb；IC50为0.48ppb；精密性：分析内的变异系数（CV%）不大于8%，分析间的变异系数（CV%）不大于8%；准确度通过回收率实验进行测定，回收率为85%～120%之间；线性相关系数|r|不小于0.9800。

技术领域

本发明涉及诊断检测技术领域，更具体地，涉及一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法及试剂盒和应用。

背景技术

醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesterone acetate，简称MPA)，又称为醋酸甲孕酮、安宫黄体酮，为甾酮类化合物，化学名称6α-甲基-17α-羟基孕甾-4-烯-3，20-二酮醋酸酯，为白色结晶性粉末，甾氯仿中极易溶解，在丙酮中溶解，在醋酸乙酯中略溶，在无水乙醇中微溶，在水中不溶。

醋酸甲羟孕酮是人工合成的孕激素，无雌激素活性，作用类似于黄体酮。在人类药物应用中，醋酸甲羟孕酮作为避孕药和激素替代治疗用药；在畜牧业中，曾被用作动物生长促进剂，以促进动物生长，提高饲料转化率，节省成本，提高经济效益。但醋酸甲羟孕酮易在动物体内残留，人食用有醋酸甲羟孕酮等激素的食品后，可扰乱人体内分泌、生长发育、免疫系统、生殖系统等方面的正常功能，还可能致癌、致畸，因此欧盟及我国都明文禁止在饲料中添加醋酸甲羟孕酮等激素类物质。

醋酸甲羟孕酮一般用量小，代谢的速度快，导致了其在动物体内残留的水平较低，故需要有高灵敏度的方法测定其残留量。目前现有的醋酸甲羟孕酮检测方法，根据检测原理主要分为色谱技术、免疫分析技术，以及紫外分光光度计法，其中色谱技术主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)和液相色谱-质谱法(LC-MS)等；免疫分析技术主要有酶联免疫吸附分析法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)等，相关的技术文献，国内外都有不少的报道，但是广大的科研工作者一直致力于研究更简便、灵敏度更高、准确性更好、自动化程度更高的检测技术，动物体内残留醋酸甲羟孕酮的监控检测也对检测方法提出了更高的准确、快速、灵敏要求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有醋酸甲羟孕酮的检测技术不足，尤其是样品中低含量醋酸甲羟孕酮残留的检测技术不足，提供一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法。

本发明另一要解决的技术问题是提供实现所述方法的试剂盒。

本发明还一要解决的技术问题是提供所述试剂盒的应用。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

提供一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法，是在磁微球上包被有羊抗鼠多克隆抗体，依次加入MPA单克隆抗体工作液、样品或标准品及吖啶酯标记MPA抗原后，样品或标准品中的MPA与吖啶酯标记的MPA抗原在液相环境中竞争结合到MPA单克隆抗体上，同时MPA单克隆抗体被分散在液相中磁微球吸附下来，形成了磁微球-MPA抗体-MPA或磁微球-MPA抗体-MPA抗原-吖啶酯的免疫复合物，经底物液1和底物液2的酸碱化学反应，即可测量化学发光反应的相对光单位(RLU/s，以下简称RLU值)；样品或标准品中MPA的含量和光学系统所测量出的相对光单位(RLU/s)成反比关系，通过标准曲线拟合，测定样品中MPA的残留量；

其中，磁微球上包被羊抗鼠多克隆抗体的方法是取清洗好的磁微球，加入BindingBuffer后混匀，然后加入Coupling Reagent溶液旋转活化反应，再加入经过BindingBuffer超滤纯化的羊抗鼠多克隆抗体进行旋转反应，反应后用洗涤液清洗磁微球即得；