[发明专利]一种具有抗谷氨酸诱导HT-22细胞氧化应激损伤作用的鹿茸活性组分及制备和应用

摘要

本发明涉及一种具有抗谷氨酸诱导HT‑22细胞氧化应激损伤作用的鹿茸活性组分的制备及其应用。本发明以鹿茸为原料，建立了具有抗氧化活性、PEP抑制活性和抗谷氨酸诱导HT‑22细胞氧化应激损伤作用的鹿茸活性组分的制备方法，该活性组分可应用于阿尔茨海默症等认知障碍疾病的预防和治疗，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种具有抗谷氨酸诱导HT‑22细胞氧化应激损伤作用的鹿茸活性组分的制备方法，其特征在于：将鹿茸提取、酶解、纯化，得到一种具有抗谷氨酸诱导HT‑22细胞氧化应激损伤作用的鹿茸活性组分；具体过程如下：1)新鲜鹿茸切碎后冷冻干燥，粉碎，加入鹿茸质量5～30倍(最优范围为10～20倍)的去离子水，升温至30～70℃(最优范围为40～55℃)后加入鹿茸质量0.1～2.0％(w/w)的蛋白酶A，搅拌提取1～5小时(最优范围为2～4)，提取结束后冷却至室温，以2500×g～15000×g于2～8℃离心5～30min，保留上清液；2)用1～6M的盐酸将提取物的pH调至1.0～5.0(最优范围为3.0～4.0)，搅拌均匀后加入鹿茸质量0.1～5.0％(w/w)(最优范围为2.0～3.0％)的蛋白酶B，在20～65℃(最优范围为30～50℃)温度下酶解0.5～24小时(最优范围为3～10小时)；酶解结束后用1～6M的NaOH溶液将pH调节至6.0～8.0(最优范围为6.5～7.5)，再加入鹿茸质量0.1～5.0％(w/w)(最优范围为2.0～3.0％)的蛋白酶C，在20～65℃(最优范围为30～50℃)温度下酶解0.5～24小时(最优范围为3～10小时)，反应结束后将温度升至90～100℃(最优范围为95～100℃)并保温10～30分钟后冷却至室温；3)酶解液以2500×g～10000×g的速度于2～8℃离心5～30分钟，上清液加水稀释至15～50mg/mL待用。将溶胀后的Sephadex G‑25填料填装成直径1.4～10.0cm、柱高与直径比5:1～10:1的凝胶柱。将酶解液加载于凝胶柱上，以去离子水为洗脱液、流速0.03～10L/h进行洗脱，收集流份并在205nm检测吸光度。检测各流份的PEP(脯氨酰内切酶)抑制活性，将PEP抑制活性最高的流份冷冻干燥，得到具有抗谷氨酸诱导HT‑22细胞氧化应激损伤作用的组分。