[发明专利]一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法

摘要

本发明属于核酸检测技术领域，公开了一种利用表面阳离子化的R‑藻红蛋白检测DNA杂交的方法。所述方法的具体步骤如下：将R‑藻红蛋白离心超滤后脱盐并稀释；然后加入阳离子聚合物PDADMAC将蛋白表面正电荷化；加入带有猝灭基团BHQ2修饰的DNA单链，荧光被猝灭高达88％左右；加入不同浓度的完全互补链后荧光不断释放。本发明的优点是：选用天然植物蛋白R‑PE与BHQ2修饰的核酸链作为荧光共振能量转移的供体和受体，加入阳离子聚合物可以提高FRET效率，当自由态时，荧光被猝灭，一旦与靶目标链相结合，荧光随即恢复，灵敏度高，由此来达到DNA杂交检测的目的。

主权项

1.一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法，其特征在于：(1)将R-藻红蛋白在4℃下离心超滤脱盐；(2)将R-藻红蛋白与阳离子聚合物PDADMAC(weight<100000，35wt.％in H2O)以1:50(摩尔浓度)的比例混合均匀；(3)用爱丁堡一体化稳态瞬态荧光光谱仪FS5分别检测阳离子化前后的R-藻红蛋白荧光强度；(4)将(2)的混合溶液与猝灭基团BHQ2修饰的DNA单链溶液以1:5(摩尔浓度)的比例混合均匀并稀释至100μL，静置2分钟后测量其荧光强度，观察到荧光猝灭88％左右；(5)将猝灭基团BHQ2修饰的DNA单链溶液与未修饰的完全互补链溶液以1:1(摩尔浓度)的比例混合均匀，然后将(2)的溶液与其以1:5(摩尔浓度)的比例混合均匀并稀释至100μL，静置2分钟后测量其荧光强度，观察到荧光强度基本没有发生变化；(6)将猝灭基团BHQ2修饰的DNA单链溶液与未修饰的完全互补链溶液分别以5:1，5:2，5:3，5:4，1:1(摩尔浓度)的比例混合均匀，然后将(2)的溶液与其以1:5(摩尔浓度)的比例混合均匀并稀释至100μL，静置2分钟后测量其荧光强度，观察到荧光强度逐渐释放，最终与R-藻红蛋白的荧光强度基本相同；(7)将猝灭基团BHQ2修饰的DNA单链溶液与未修饰的单碱基错配互补链溶液以1:1(摩尔浓度)的比例混合均匀，然后将(2)的溶液与其以1:5(摩尔浓度)的比例混合均匀并稀释至100μL，静置2分钟后测量其荧光强度，观察到荧光强度猝灭20％左右。