[发明专利]一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法

权利要求书

1.一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法，其特征在于：

(1)将R-藻红蛋白在4℃下离心超滤脱盐；

(2)将R-藻红蛋白与阳离子聚合物PDADMAC以摩尔浓度1:50的比例混合均匀；

(3)用爱丁堡一体化稳态瞬态荧光光谱仪FS5分别检测阳离子化前后的R-藻红蛋白荧光强度；

(4)将(2)的混合溶液与猝灭基团BHQ2修饰的DNA单链溶液以摩尔浓度1:5的比例混合均匀并稀释至100μL，静置2分钟后测量其荧光强度，观察到荧光猝灭88％左右；

(5)将猝灭基团BHQ2修饰的DNA单链溶液与未修饰的完全互补链溶液以摩尔浓度1:1的比例混合均匀，然后将(2)的溶液与其以摩尔浓度1:5的比例混合均匀并稀释至100μL，静置2分钟后测量其荧光强度，观察到荧光强度基本没有发生变化；

(6)将猝灭基团BHQ2修饰的DNA单链溶液与未修饰的完全互补链溶液分别以摩尔浓度5:1，5:2，5:3，5:4，1:1的比例混合均匀，然后将(2)的溶液与其以摩尔浓度1:5的比例混合均匀并稀释至100μL，静置2分钟后测量其荧光强度，观察到荧光强度逐渐释放，最终与R-藻红蛋白的荧光强度基本相同；

(7)将猝灭基团BHQ2修饰的DNA单链溶液与未修饰的单碱基错配互补链溶液以摩尔浓度1:1的比例混合均匀，然后将(2)的溶液与其以摩尔浓度1:5的比例混合均匀并稀释至100μL，静置2分钟后测量其荧光强度，观察到荧光强度猝灭20％左右。

2.按权利要求1所述的一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法，其特征在于：所述步骤(1)～(7)中稀释所用的缓冲液为50mMPBS缓冲液，pH＝7.5。

3.按权利要求1所述的一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法，其特征在于：所述步骤(1)中离心条件优选为3800rcf，离心25～30min。

4.按权利要求1所述的一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法，其特征在于：所述步骤(1)中所述的超滤次数优选为4～5次，超滤管大小为100kD。

5.按权利要求1所述的一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法，其特征在于：所述步骤(3)～(7)中所述的荧光强度的检测，激发波长为535nm，发射波长为575nm。

6.按权利要求1所述的一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法，其特征在于：所述步骤(4)～(7)中所述的BHQ2修饰的DNA单链可以为任意序列的通链。