[发明专利]一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法

说明书

本发明属于核酸检测技术领域，公开了一种利用表面阳离子化的R‑藻红蛋白检测DNA杂交的方法。所述方法的具体步骤如下：将R‑藻红蛋白离心超滤后脱盐并稀释；然后加入阳离子聚合物PDADMAC将蛋白表面正电荷化；加入带有猝灭基团BHQ2修饰的DNA单链，荧光被猝灭高达88％左右；加入不同浓度的完全互补链后荧光不断释放。本发明的优点是：选用天然植物蛋白R‑PE与BHQ2修饰的核酸链作为荧光共振能量转移的供体和受体，加入阳离子聚合物可以提高FRET效率，当自由态时，荧光被猝灭，一旦与靶目标链相结合，荧光随即恢复，灵敏度高，由此来达到DNA杂交检测的目的。

技术领域：

本发明属于核酸检测领域，具体涉及一种利用表面阳离子化的R-藻红蛋白检测DNA杂交的方法。

背景技术：

R-藻红蛋白(R-phycoerythrin)是从海藻中分离纯化提取的，是一种目前普遍使用的新型荧光标记材料，其荧光强度是荧光素的30-100倍，具有很好的吸光性能和很高的量子产率。将藻红蛋白用于荧光分析，具有传统化学荧光染料无法比拟的优越性：1、在较宽的PH范围内具有较宽的吸收光谱，比较容易选择合适的激发波长，从而得到高效荧光发射，且激发时有特异的荧光发射峰；2、吸光度和荧光量子产率很高，荧光强而稳定，灵敏度高；3、具有较小的荧光背景，不易淬灭，荧光保存期较长；4、水溶性极佳，易于其他分子交联结合，非特异性吸附少；5、纯天然海洋生物提取，无任何毒副作用，不含放射性，操作使用非常安全。

PDADMAC(Poly dimethyl diallyl ammonium chloride)聚二甲基二烯丙基氯化铵，是一种化学物质。本品为强阳离子聚电解质，外观为无色至淡黄色粘稠液体。安全、无毒、易溶于水、不易燃、凝聚力强、水解稳定性好、不成凝胶，对pH值变化不敏感，有抗氯性。凝固点约-2.8℃，比重约1.04g/cm，分解温度280-300℃，且其本身对藻红蛋白的荧光特性无任何影响。

目前，开发DNA杂交检测方法的研究已经成为国内外的热点，其中最多的是利用纳米材料来检测，如金胶、量子点、碳纳米管、上转换纳米颗粒等。H Peng等人利用蓝色量子点与染料标记的单链DNA合成探针来检测DNA的杂交(Peng H,Zhang L,T H,etal.DNAhybridization detection with blue luminescent quantum dots and dye-labeled single-stranded DNA[J].Journal of the American Chemical Society,2007,129(11):3048-9.)。R Yang等人利用碳纳米管荧光猝灭单核苷酸探针来实现对DNA杂交的检测(Yang R,Jin J,Chen Y,et al.Carbon nanotube-quenched fluorescentoligonucleotides:probes that fluoresce upon hybridization.[J].Journal of theAmerican Chemical Society,2008,130(26):8351.)。H Li等人利用非修饰的金纳米颗粒与DNA序列之间的静电相互作用，通过比色法实现了DNA杂交的检测(Li H,RothbergL.Colorimetric detection of DNAsequences based on electrostatic interactionswith unmodified gold nanoparticles.[J].Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America,2004,101(39):14036.)。

迄今为止，利用荧光蛋白来检测DNA杂交的技术还没有涉及。因此，本专利发明了一种新的检测DNA杂交的方法，即利用表面阳离子化的藻红蛋白来检测DNA杂交。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种新的DNA杂交检测的方法。