[发明专利]一种应用大肠杆菌胞外生产N-糖基化重组蛋白的方法有效
| 申请号： | 201711213274.9 | 申请日： | 2017-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN107904254B | 公开（公告）日： | 2021-11-23 |
| 发明（设计）人： | 胡学军;丁宁;阮瑶;付鑫;吴凡凡;王莉娟 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/90 |
| 代理公司： | 大连八方知识产权代理有限公司 21226 | 代理人： | 朱秀芬 |
| 地址： | 116622 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体是一种大肠杆菌胞外生产N‑糖基化重组蛋白的方法。本发明方法主要步骤包括构建敲除大肠杆菌外膜脂蛋白Lpp基因的大肠杆菌菌株、引入外源N‑糖基化机制到所构建的大肠杆菌中、构建质周腔中表达目的蛋白的载体及自动诱导方式表达目的蛋白，可实现利用大肠杆菌N‑糖基化修饰目的蛋白并实现N‑糖基化蛋白分泌到胞外。该方法降低了外源基因表达产物在质周腔过度积累所造成的代谢负荷，提高了N‑糖基化目的蛋白总产量；无需破碎细菌而从培养基中直接分离纯化N‑糖基化蛋白，简化了分离纯化步骤，易于大规模工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 应用 大肠杆菌 外生 糖基化 重组 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种应用大肠杆菌胞外生产N‑糖基化重组蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)大肠杆菌W3110ΔWecAΔLpp菌株构建；(2)构建大肠杆菌质周腔中表达目的蛋白的载体，结合空肠弯曲杆菌N‑糖基化机制，得到能胞外生产N‑糖基化重组蛋白的重组大肠杆菌；(3)步骤(2)中获得的能胞外生产N‑糖基化重组蛋白的重组大肠杆菌在自动诱导培养基中诱导胞外生产N‑糖基化重组蛋白；(4)步骤(3)获得的重组蛋白纯化后即得N‑糖基化重组蛋白。
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