[发明专利]一种临床级神经干细胞的制备方法

摘要

本公开提供一种临床级神经干细胞的制备方法：a)提供单个神经干细胞；b)神经干细胞接种到常规培养瓶中，此后更换为低吸附培养瓶；c)在培养基中添加肿瘤坏死因子‑α、白蛋白、B27、无动物原性细胞因子刺激神经干细胞的增殖；d)根据生长状况进行半量换液；e)根据生长状况进行消化传代；f)收获得到高纯度高活性且高分化潜能的临床级神经干细胞。本公开的方法操作简单，所得细胞纯度高且增殖能力强。通过本公开的方法制备的神经干细胞符合临床级要求。

主权项

1.一种临床级神经干细胞的制备方法，其包括：a)提供单个神经干细胞；b)以3×105/ml至5×105/ml的浓度，将所述的神经干细胞接种到常规培养瓶中维持12至24小时；c)以1×105/ml至3×105/ml的浓度，将所述神经干细胞转移至低吸附培养瓶，所述低吸附培养瓶中的培养基包含：DMEM/F12无血清培养基和细胞因子；其中所述的细胞因子选自：50ng/mL至100ng/mL肿瘤坏死因子-α、按质量/体积计10％至15％白蛋白、按质量/体积计1％至2％B27、20ng/ml至30ng/ml EGF、20ng/ml至30ng/ml bFGF、20ng/m至30ng/mL CNTF、10ng/ml至20ng/ml IGF-1、及其组合；d)每3至5天，优选每4天，进行半量换液；e)每6至9天，优选每8天，对所述神经干细胞进行传代，任选地计数细胞数量和/或活性检测；f)收获第3至11代优选第四代的神经干细胞。