[发明专利]一种荧光免疫定量检测MFAP纳米药物载体的方法

摘要

本发明提供了一种荧光免疫定量检测MFAP纳米药物载体的方法，本发明以介孔二氧化硅纳米颗粒为基体，二氧化硅纳米粒子比表面积大，稳定性好，荧光染料负载率高；以荧光染料氟硼吡咯(BODIPY)和罗丹明B共掺杂，两种荧光染料之间能够发生荧光共振能量转移，提高了荧光强度，减少了猝灭；采用过碘酸钠法偶联抗体提高了偶联效率，消除了交联剂对抗体活性的影响。充分利用了免疫学反应中抗原抗体的高特异性，并且与荧光的敏感性相结合，使免疫反应的信号进一步提高，实现了对纳米药物载体的超灵敏检测。

主权项

一种荧光免疫定量检测MFAP纳米药物载体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a、MFAP全抗原的制备；b、抗MFAP高特异性多克隆抗体的制备；c、二氧化硅荧光纳米标记探针的制备；d、二氧化硅荧光纳米标记探针采用过碘酸钠法偶联抗体；e、荧光免疫定量检测MFAP纳米药物载体的方法建立；以MFAP标准品浓度的对数为横坐标，荧光强度值为纵坐标绘制标准曲线，构建浓度与荧光强度线性关系，从而定量检测出MFAP的浓度；步骤c包括以下步骤：c‑1、将十六烷基三甲基溴化铵CTAB溶于去离子水；c‑2、加入乙二醇和浓氨水，反应；c‑3、之后加入正硅酸乙酯TEOS反应；c‑4、然后，再加入混合好的BODIPY溶液和罗丹明B溶液，再加入三甲氧基甲基硅烷MTMS，反应；c‑5、最后，加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷APTES继续反应，完成反应后，搅拌冷却至室温并离心洗涤，冷冻干燥，得二氧化硅荧光纳米标记探针。