[发明专利]一种海水养殖用微生态制剂及其制备方法和应用

摘要

一种海水养殖用微生态制剂及其制备方法和应用，该微生态制剂包括嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母和侧孢芽孢杆菌，将嗜酸乳杆菌用MRS培养基、啤酒酵母用PDA培养基、枯草芽孢杆菌用牛肉膏蛋白胨、侧孢芽孢杆菌进行菌液活化后，采用KJ培养基，分别进行活化，KJ培养基包括玉米面，豆粕，麸皮，红糖，鱼粉，海水晶，氯化钠，沸石粉；四种培养液分别离心后，混合，接种量接于KJ培养基中，进行复合培养；转接于KJ培养基，静置培养，得到复合种子液；接入KJ培养基发酵培养，得到产品。优点是：对水质改良以及抑制有害藻类和石莼等好氧生物的生长，应用于海水养殖中，可以降低水体氨氮、亚硝氮、总磷的含量，减少水产病害的发生率。 1

主权项

1.一种海水养殖用微生态制剂，其特征是：该微生态制剂包括嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母和侧孢芽孢杆菌，其中，每克复合微生态制剂中含有：嗜酸乳杆菌活菌数为2.0×10⁸cfu/mL‑6.0×10⁸cfu/mL，枯草芽孢杆菌活菌数为1.0×10⁹cfu/mL‑3.0×10⁹cfu/mL，啤酒酵母活菌数为4.0×10⁸cfu/g‑8.0×10⁸cfu/g，侧孢芽孢杆菌活菌数为1.0×10⁹cfu/g‑2.0×10⁹cfu/g。

2.一种如权利要求1所述的海水养殖用微生态制剂的制备方法，其特征是：

具体步骤如下：

(1)培养基组成

MRS培养基，1L：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，柠檬酸二胺2g，K₂HP0₄·3H₂O 2g，CH₃COONa 5g，MgSO₄·7H₂O 0.58g，MnSO₄·4H₂0 0.25g，吐温80 1.0mL，pH为6.2‑6.6；PDA培养基，1L：马铃薯200g，葡萄糖20g，自然pH；

牛肉膏蛋白胨培养基，1L：蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl 5g，K₂HPO₄·3H₂O 20mg，pH 7.0；KJ培养基—复合培养基，1L：玉米面10g，豆粕10g，麸皮10g，红糖5g，鱼粉5g，海水晶2g，氯化钠2g，沸石粉5g，pH7.0；

(2)菌液活化Ⅰ

将嗜酸乳杆菌用MRS培养基，在30℃下静置培养24h；

将啤酒酵母用PDA培养基，在30℃下静置培养24h；

将枯草芽孢杆菌用牛肉膏蛋白胨，在30℃下静置培养36h；

将侧孢芽孢杆菌用牛肉膏蛋白胨，在30℃下静置培养36h；

(3)菌液活化Ⅱ

取步骤(2)活化培养菌种，采用100mL KJ培养基，分别在30℃静置培养24h，进行活化；

(4)复合培养

取步骤(3)各菌株活化液5mL，8000r/min离心，菌体用无菌水洗涤2次，将菌液啤酒酵母菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌和侧孢芽孢杆菌按照体积比为3:2:1:1混合；按5％接种量接于100mL KJ培养基中，在30℃～37℃静置培养48h～72h，进行复合培养，采用KJ培养基按此方式活化两次；

(4)复合菌种子液的制备

复合培养后以10％接种量转接于300mL KJ培养基，30℃～37℃静置培养24h～36h，得到复合种子液；

(5)复合菌的扩大培养

取复合菌种子液，以10％接种量接入KJ培养基，在温度为30℃～37℃，pH为7.0的条件下，发酵培养48h～72h，得到海水养殖用微生态制剂。

3.根据权利要求2所述的所述海水养殖用微生态制剂的制备方法，其特征是：嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母和侧孢芽孢杆菌的分离材料是养殖环境的海水底泥，分离出的细菌能够适应海水的高盐度，降低海水渗透压对细菌本身的影响，成活率高。

4.一种如权利要求1所述的海水养殖用微生态制剂在海水养殖海产品中的应用。

5.根据权利要求4所述的海水养殖用微生态制剂在海水养殖海产品中的应用，其特征是：所述海水养殖用微生态制剂的添加量为3mg/L～10mg/L。