[发明专利]一种利用免疫胶体金渗滤法检测罗非鱼无乳链球菌抗体的方法

摘要

本发明公开了一种利用免疫胶体金渗滤法检测罗非鱼无乳链球菌抗体的方法，属于鱼类疫病检测技术领域。本发明的方法包括如下步骤S1、制备胶体金；S2、胶体金标记单克隆抗体；S3、无乳链球菌的包被；S4、罗非鱼无乳链球菌抗体的检测及结果判断。本方法具有检测快速、操作简便、灵敏度高、特异性较好等优点，能为生产上提供罗非鱼无乳链球菌病有效的诊断监测技术，以保证及时控制罗非鱼无乳链球菌病的危害。

主权项

一种利用免疫胶体金渗滤法检测罗非鱼无乳链球菌抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、制备胶体金：采用Frens法制备胶体金溶液；S2、胶体金标记单克隆抗体：取步骤S1制备好的胶体金溶液，加入K2CO3，一边搅拌一边加入，10‑20min后加入罗非鱼免疫球蛋白单克隆抗体，搅拌10‑20min，加入新配制的10％BSA，继续搅拌10‑20min后进行离心，离心结束后取出离心管，小心吸弃上清液，补充加入含BSA的PB缓冲液，洗涤，再离心一次，弃去上清液后，加入重悬液，即可得到胶体金标记好的单克隆抗体液，即为金标液，将金标液置于2‑5℃保存，备用；S3、无乳链球菌的包被无乳链球菌点样处理：将灭活的无乳链球菌点加在硝酸纤维素膜上作为检测点，再将羊抗鼠IgG也点加在硝酸纤维素膜上作为对照点，完成点样，室温干燥后，用PBST洗涤液洗涤2‑3次，干燥后加入5％BSA至硝酸纤维素膜被渗透，封闭10‑20min，然后用PBST洗涤液洗涤2‑3次，凉干，得到硝酸纤维素样品膜，放2‑5℃保存，备用；S4、罗非鱼无乳链球菌抗体的检测及结果判断A检测过程：检测时，使用步骤S3点样处理后的硝酸纤维素样品膜进行检测，在硝酸纤维素样品膜加入待检罗非鱼血清，罗非鱼血清渗滤后，加入PBST洗涤液，PBST洗涤液渗滤过后，加入步骤S2制得的金标液，金标液渗滤完后再加入PBST洗涤液，检测完成；B结果判断：检测完成后同时观察硝酸纤维素样品膜的变化，在5min内，若硝酸纤维素样品膜上出现两个斑点，即对照斑点和检测斑点，则是阳性；若硝酸纤维素样品膜只出现对照斑点，则是阴性；若硝酸纤维素样品膜不出现对照斑点，则结果判为无效。