[发明专利]T细胞抗原受体多样性测序文库的构建方法以及试剂盒有效
| 申请号： | 201711051509.9 | 申请日： | 2017-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN107779495B | 公开（公告）日： | 2022-02-22 |
| 发明（设计）人： | 冯林;张雅静;郭丽萍;刘玲玲;匡满超;程书钧;张开泰;肖汀;张文 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京卓孚律师事务所 11821 | 代理人： | 谢梦欣 |
| 地址： | 100021 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及T细胞抗原受体多样性测序文库的构建方法以及试剂盒。所述方法利用针对人或小鼠TRB基因C区共有序列设计的特异性引物，扩增人或小鼠T淋巴细胞表达的TRB基因的V，D和J区，并同步将二代测序接头序列引入扩增产物，直接对TRB基因的V，D和J区进行测序。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 抗原 受体 多样性 序文 构建 方法 以及 试剂盒 | ||
【主权项】：
用于构建人或动物TRB基因V，D和J区的测序文库的方法，所述方法包括从受试者的生物样品提取总RNA，基于模板转换技术对TRB基因的V，D和J区进行反转录在cDNA的3’端添加共有序列和分子标签，并随后进行多轮巣式PCR，同时将测序接头序列添加到终产物中，所述反转录和巣式PCR中使用的下游引物为针对共有序列和TRB基因C区设计的嵌套TRBC特异性引物，上游引物为基于模板转换技术中待引入反转录产物中的共有序列和分子标签设计的引物，反转录和每轮巣式PCR的扩增体系中只使用一条下游引物和一条上游引物，优选地，所述TRB基因为人TRB基因或鼠TRB基因，优选地，所述受试者的生物样品是人或小鼠的肿瘤组织；外周血白细胞；包含淋巴细胞的胸水腹水、关节液、脑脊液；以及选自如下的组织器官：脾脏、淋巴结、皮肤。
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