[发明专利]靶向wls基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建方法在审
申请号: | 201711027633.1 | 申请日: | 2017-10-27 |
公开(公告)号: | CN109722448A | 公开(公告)日: | 2019-05-07 |
发明(设计)人: | 蒋欣泉;杜佳慧;林淑贤 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 |
主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867 |
代理公司: | 上海宣宜专利代理事务所(普通合伙) 31288 | 代理人: | 杨小双 |
地址: | 200011 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明涉及靶向wls基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建、筛选及其用途。本发明利用RNA干扰技术,针对wls基因,构建了能在相关细胞中表达shRNA的慢病毒真核表达载体,干扰慢病毒是由V#wls‑shRNA重组载体质粒、病毒包装辅助质粒(Helper 1.0、Helper 2.0)三质粒共转染293T细胞培养获得。本发明靶向wls基因RNA干扰重组慢病毒载体能高效、特异地抑制细胞wls基因表达,可为研究wls对相关细胞的分化及功能、相应组织的生长及发育等的调控作用提供一种有效的工具。发明还进一步公开了靶向wls基因RNA干扰重组慢病毒载体在研究骨组织生长发育过程中wnt配体来源方面的应用,并为实现wnt信号通路在骨组织再生方面的应用提供了一定的理论基础。 | ||
搜索关键词: | 重组慢病毒载体 基因RNA 靶向 构建 慢病毒 细胞 细胞培养 真核表达载体 重组载体质粒 骨组织生长 骨组织再生 病毒包装 调控作用 发育过程 辅助质粒 基因表达 理论基础 应用提供 质粒共转 发育 分化 筛选 基因 生长 研究 应用 | ||
【主权项】:
1.一种靶向wls基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:分别构建V#wls‑shRNA重组载体质粒、病毒包装辅助质粒Helper 1.0和病毒包装辅助质粒Helper 2.0;将所述V#wls‑shRNA重组载体质粒、病毒包装辅助质粒Helper 1.0和病毒包装辅助质粒Helper 2.0共同对293T细胞进行转染,得到所述靶向wls基因RNA干扰重组慢病毒载体。
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