[发明专利]用于检测华法林用药相关基因多态性的引物对及试剂盒

摘要

本发明涉及一种用于检测华法林用药相关基因多态性的引物对及试剂盒，属于体外核酸检测技术领域。所述引物对包括分别针对VKORC1‑1639、CYP2C9*2、CYP2C9*3等位基因及GAPDH内参基因的扩增引物；所述试剂盒包括包含所述扩增引物的PCR反应液。本发明提供的所述试剂盒灵敏度高，可达万分之一，最低检测限仅为1‑2拷贝，特别适合于低含量突变样本的检测；与测序法相比，本发明的检测结果可实时观察，产物不需要凝胶电泳检测，完全闭管操作，有效地降低了PCR产物污染的风险；此外，还具有检测速度快，适用于高通量样本检测的优点。

主权项

1.一种用于检测华法林用药相关基因多态性的引物对，其特征在于，所述华法林用药相关基因检测的多态性位点分别为VKORC1‑1639、CYP2C9*2和CYP2C9*3，所述引物对包括：针对VKORC1‑1639等位基因的扩增引物，如下：扩增VKORC1‑1639野生型和突变型通用下游引物和探针：下游引物，如SEQ ID NO：1所示，5’‑CTCAAGTGATCCACCCACCT‑3’，探针，如SEQ ID NO：2所示5’FAM‑TGCGGTGGCTCACGCCTATAATCCTAGC‑TAMRA 3’；扩增VKORC1‑1639野生型上游引物，如SEQ ID NO：3所示：5’‑CGTCATATACCATCATTTGACG‑3’；扩增VKORC1‑1639突变型上游引物，如SEQ ID NO：4所示：5’‑CGTCATATACCATCATTTGACA‑3’；针对CYP2C9*2等位基因的扩增引物，如下：扩增CYP2C9*2野生型和突变型通用下游引物和探针：下游引物，如SEQ ID NO：5所示，5’‑CTATGCATCTGTCTACAACAGTTAC‑3’，探针，如SEQ ID NO：6所示，5’FAM‑AGGAAGCCCGCTGCCTTGTGG‑TAMRA 3’；扩增CYP2C9*2野生型上游引物，如SEQ ID NO：7所示，5’‑TACATGCTCATGTGTATCC‑3’；扩增CYP2C9*2突变型上游引物，如SEQ ID NO：8所示，5’‑TACATGCTCATGTGTATCT‑3’；针对CYP2C9*3等位基因的扩增引物，如下：扩增CYP2C9*3野生型和突变型通用下游引物和探针：下游引物，如SEQ ID NO：9所示，5’‑CGTGTGATTGGCAGAAACC‑3’，探针，如SEQ ID NO：10所示，5’FAM‑AGTTCGCAGTCCTGCGTCACTCGC‑TAMRA 3’；扩增CYP2C9*3野生型上游引物，如SEQ ID NO：11所示，5’‑AGTGCGCAGTGACGTCTAT‑3’；扩增CYP2C9*3突变型上游引物，如SEQ ID NO：12所示，5’‑AGTGCGCAGTGACGTCTAG‑3’；针对GAPDH内参基因的扩增引物，如下：扩增GAPDH基因的上游引物，如SEQ ID NO：13所示，5’‑ATCCTGGGCTACACTGAGCAC‑3’；扩增GAPDH基因的下游引物，如SEQ ID NO：14所示，5’‑CTCAGTGTAGCCCAGGATGCCCTT‑3’；扩增GAPDH基因的探针，如SEQ ID NO：15所示，5’JOE‑AGGTGGTCTCCTCTGACTTCAA‑TAMRA 3’。