[发明专利]基于核酸质谱技术检测乳腺癌早期诊断相关基因的方法

摘要

本发明属于基因检测领域，具体涉及一种基于核酸质谱技术检测乳腺癌早期诊断相关基因的方法。本发明提供4个基因的15个与乳腺癌相关的突变位点和10个基因的18个乳腺癌易感SNP位点的组合检测方法，利用SequenomMassARRAYSNP基因型分析技术对乳腺癌易感基因的SNP位点和与乳腺癌相关的基因突变位点进行基因分型检测。该方法对于乳腺癌的早期筛查更准确、技术重现性好、性价比高；相较于TaqMan‑PCR及二代平台测序的SNP检测，具有设计灵活、准确性高、检测位点样本量大、成本低等优点，可同时对数十个SNP位点进行数百至数千份样本检测。

主权项

一种基于核酸质谱技术检测乳腺癌早期诊断相关基因的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)筛选出评估个体罹患乳腺癌风险的基因突变位点和乳腺癌易感SNP位点；(2)设计步骤(1)的基因突变位点和乳腺癌易感SNP位点的扩增引物和单碱基延伸引物；(3)将步骤(2)中的扩增引物分为4组，各组中所含的各SNP位点和基因突变位点的上下游引物混合，得到4组对应的扩增引物混合液；(4)对应于步骤(3)中扩增引物分组的方式，将步骤(2)中的单碱基延伸引物分为4组，分别得到4组单碱基延伸引物混合液；(5)以待测样本DNA为模板，利用步骤(3)中的每组扩增引物混合液为引物分别进行PCR扩增，获得目标位点的PCR产物；(6)虾碱式磷酸酶消化步骤(5)反应体系中剩余的dNTP；(7)利用各组相对应的单碱基延伸引物对步骤(6)消化后的产物进行单碱基延伸反应，获得延伸产物；(8)脱盐树脂纯化延伸产物；(9)MassARRAY平台检测分析进行芯片点样、扫描，检测结果使用TYPER4.0软件(sequenom)分型并输出结果，通过质谱峰变异碱基处是否出峰来判断是否突变。