[发明专利]一种TGFBI基因多态性快速检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种TGFBI基因多态性快速检测试剂盒及其检测方法。本发明的试剂盒由核酸释放剂、探针混合物、2X反应缓冲液、阳性质控品、阴性质控品和超纯水组成。本发明采用一种核酸快速释放剂，一步法完成口腔脱落细胞、全血样品以及干血斑样本中核酸的快速释放，获得的核酸可直接用于单核苷酸多态性TaqMan探针法检测，具有操作简便、使用安全，成本低廉、实验结果可重复性好等优点，适合在临床基因检测中推广应用。

主权项

一种TGFBI基因多态性快速检测试剂盒，其特征在于由核酸释放剂、探针混合物、2X反应缓冲液、阳性质控品、阴性质控品和超纯水组成；所述的核酸释放剂由5～500mM Tris‑HCl,、50～1000mM NaCl，0.1～10mM EDTA、质量/体积比为0.01％～2％的SDS、质量/体积比为0.04％～3％的LLS和质量/体积比为0.01％～2％的甜菜碱组成，其中的百分比以无菌水体积为计算基准；所述的探针混合物是TGFBI基因的R124H、R555W、R555Q、R124C、R124L或P501T位点引物探针，探针3’端的淬灭基团可以为：BHQ1、BHQ2、MGB、TAMRA、Eclipse‑2或Dabcy1‑2，具体如下：探针混合物#1：TGFBI基因R124H位点引物探针：上游引物：5'‑CATCCCTCCTTCTGTCTTCTG‑3'下游引物：5'‑CGGAGGTCATCTCACAGC‑3'FAM‑5'‑CACTCAGCTGTACACGGACCGCACGG‑3'‑QVIC‑5'‑TCTCAGGCCTCAGCTTCTCCGTGTG‑3'‑Q；探针混合物#2：TGFBI基因R555W位点引物探针：上游引物：5'‑GGTAGCTGCCATCCAGTC‑3'下游引物：5'‑GTCTTGTCATAAAATCCCTTCAA‑3'FAM‑5'‑AGCCCTGCCACCAAGAGAACGGAGC‑3‑Q'VIC‑5'‑GTCTTTACCCAAGAGTCTGCTCCATTCTCTTG‑3‑Q'；探针混合物#3：TGFBI基因R555Q位点引物探针：上游引物：5'‑GGTAGCTGCCATCCAGTC‑3'下游引物：5'‑GTCTTGTCATAAAATCCCTTCAA‑3'FAM‑5'‑AGCCCTGCCACCAAGAGAACGGAGC‑3'‑QVIC‑5'‑GTCTTAGCCCAAGAGTCTGCTCCATTCTCTTG‑3'‑Q；探针混合物#4：TGFBI基因R124C位点引物探针：上游引物：5'‑CATCCCTCCTTCTGTCTTCTG‑3'下游引物：5'‑CGGAGGTCATCTCACAGC‑3'FAM‑5'‑CACTCAGCTGTACACGGACCGCACGG‑3'‑QVIC‑5'‑TCTCAGGCACCAGCTTCTCCGTGTG‑3'‑Q；探针混合物#5：TGFBI基因R124L位点引物探针：上游引物：5'‑CATCCCTCCTTCTGTCTTCTG‑3'下游引物：5'‑CGGAGGTCATCTCACAGC‑3'FAM‑5'‑CACTCAGCTGTACACGGACCGCACGG‑3'‑QVIC‑5'‑TCTCAGGCCACAGCTTCTCCGTGTG‑3'‑Q；探针混合物#6：TGFBI基因P501T位点引物探针：上游引物：5’‑CACGACAAGAGGGGGAGGTAC‑3’下游引物5’‑AAGCTCCACCCGGGGA‑3’FAM‑5’‑GATGGACCGGGTGCTGACCCCCCCAA‑3’‑QVIC‑5‑CATCCATGACAGTCCCCATTGTGGGG‑3’‑Q；所述的阳性质控品是人工合成包括R124H、R555W、R555Q、R124C、R124L、P501T位点突变经一代测序验证无误的TGFBI基因质粒；所述的阴性质控品是人工合成不包括R124H、R555W、R555Q、R124C、R124L、P501T位点突变经一代测序验证无误的TGFBI基因质粒。