[发明专利]一种快速优化酵母细胞工厂的方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种快速优化酵母细胞工厂的方法。本发明利用单倍体酿酒酵母间能通过交配形成二倍体的特点，以及改善的Cre‑LoxP系统的特异性重组技术，大大提高了基因组重排的效率，以数量庞大的基因组发生重排的酵母菌株文库为基础，简单快速地将目标菌株优化并筛选出高产菌株，相对于现有改造代谢通路中某个基因的优化技术，本发明方法更具通用型，并且成本更低，效率更高。

主权项

一种快速优化酵母细胞工厂的方法，其特征在于，包括：步骤1、构建在至少两个非必需基因的3’端或至少两个完整功能元件3’端插入SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的待交配单倍体酵母；步骤2、将需要优化的生产化学品的单倍体酵母与步骤1所述待交配单倍体酵母进行交配，形成二倍体酵母菌株；步骤3、将带有筛选标签的能够表达Cre重组酶的质粒转化到所述二倍体酵母菌株，然后在所述筛选标签对应的培养基上培养，同时加入雌激素开启Cre重组酶的表达进行基因重排，培养完成后除去雌激素关闭Cre重组酶的表达，获得基因组重组的二倍体酵母菌株文库；步骤4、将步骤3所获得的二倍体酵母菌株稀释涂布在步骤3所述筛选标签对应的培养基上培养，与步骤2所述二倍体酵母菌株相比，挑选出菌落较大以及颜色差异明显的二倍体酵母菌株作为潜在高产菌株，然后通过摇瓶发酵和HPLC测定化学品产量，产量最高的酵母为优化后的酵母。