[发明专利]一种人体免疫复合因子的制备方法及应用

摘要

本发明提出了一种人体免疫复合因子的制备方法，包括人外周血单个核细胞的分离、人外周血单个核细胞的培养与诱导、细胞的纯化除杂以及细胞的破碎和产物的提取。其作用机理是将外周血(包括脐血)中的单个核细胞(主要是淋巴细胞)培养扩增，在一定条件下诱导其产生有效的免疫复合因子，包括多肽及各种小分子物质，所以临床效果更明显，作用更全面。另外，由于排除了外源性细胞的输入，输入后不会引起发热、乏力、肌肉酸痛等副作用，所以安全性高，免疫功能更全面。本发明制备的单核细胞诱导冻融提取物，使用方便、易于保存和运输，可同时作为提高机体免疫力、抗衰老及治疗肿瘤等疾病的有效生物制剂。

主权项

1.一种人体免疫复合因子的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)人外周血单个核细胞的分离：通过仪器单采或人工抽取人外周血，肝素抗凝处理及Ficoll密度梯度离心法分离得到单个核细胞；2)人外周血单个核细胞的培养与诱导：将所得的单个核细胞重悬并置于AIM‑V无血清培养基培养，调整细胞浓度为1×106个/mL，同时加入植物血凝素使得植物血凝素在体系中所占含量为10‑100ug/mL，继续置于37℃、5％的CO2孵箱中培养，以后隔日补加AIM‑V无血清培养液，培养5‑10天，使细胞浓度至少达到1×107个/mL，收获细胞；3)细胞的纯化除杂：将收获的细胞用生理盐水洗涤三次，以除去培养液中所有成分；4)细胞破碎和产物收集：在收集的细胞中加入生理盐水，将细胞稀释成2×106个/mL悬液，经超声粉碎并重复冻融裂解处理后，离心收集上清即为免疫复合因子，冷冻保藏即可。