[发明专利]一种利用HPLC-MS/MS测定草莓果实中花色苷组分及含量的方法

摘要

本发明涉及一种利用HPLC‑MS/MS测定草莓果实中花色苷组分及含量的方法，包括以下步骤：(1)通过液氮研磨、超声波萃取的方法，用1％的盐酸甲醇提取草莓果实花色苷；(2)摸索最优的色谱条件，包括色谱柱、流动相、流动相梯度等条件；(3)确定质谱条件；(4)按照(2)和(3)的色谱和质谱条件，通过串联飞行时间质谱仪分析草莓果实中花色苷组分；(5)按照(2)的色谱条件，利用花葵素‑3‑葡糖苷绘制标准曲线，用标准曲线法计算花色苷含量。该方法特别适合分离和检测花色苷，具有分辨率高、可靠性高、精密度高和重复性高的特点，且首次从草莓中检测出了芍药素‑3‑葡萄苷、芍药素‑丙二酰葡糖苷和芍药素‑3‑甲基丙二酰葡糖苷。

主权项

一种利用HPLC‑MS/MS测定草莓果实中花色苷组分及含量的方法，其特征在于以下步骤：(1)取成熟期草莓果实，用锡箔纸包埋后液氮速冻，‑80℃冰箱保存备用。(2)取步骤(1)的草莓果实，液氮充分研磨，精确称取样品0.5g，加入1ml 1％盐酸‑甲醇(v/v)溶液，避光超声波萃取30min，4℃下12000rpm离心10min，取上清液经0.22mm有机滤膜过滤，即配制成样品溶液。(3)取步骤(2)的样品溶液，采用串联飞行时间质谱仪进行质谱分析，质量分析器为三重四级杆‑飞行时间质谱仪(AB Sciex TripleTOF 5600+)，HPLC为岛津高效液相色谱仪LC20A，色谱条件为：色谱柱：ZORBAX SB‑C18柱4.6×250mm，柱温30℃，流速1.0mL/min，进样体积5μL，洗脱方式为梯度洗脱，流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为5％(v/v)甲酸水溶液，B为甲醇溶液，检测波长为520nm，记录时间为35min；质谱条件为：电喷雾电离源(ESI)，正离子检测，全离子扫描范围(m/z)为200～1500，离子源补偿电压为5.5kV，源温度为500℃，离子源气体1(空气)和气体2(空气)电压为50psi，干燥气压(N2)为35psi，去簇电压为80V，撞击能量为5V，驻留时间为250ms，二级采集模式下撞击能量和驻留时间分别为35±15V和50ms；(4)配制花葵素‑3‑葡糖苷标准溶液，按照步骤(3)的液相色谱条件高效液相色谱分析绘制标准曲线。(5)按照步骤(3)的液相色谱条件，取草莓果实样品溶液进行高效液相色谱分析，用标准曲线法计算出草莓果实中花葵素‑3‑葡糖苷含量，同时根据峰面积用花葵素‑3‑葡糖苷的标准曲线法计算其它花色苷物质含量。