[发明专利]一种利用HPLC-MS/MS测定草莓果实中花色苷组分及含量的方法

说明书

本发明涉及一种利用HPLC‑MS/MS测定草莓果实中花色苷组分及含量的方法，包括以下步骤：(1)通过液氮研磨、超声波萃取的方法，用1％的盐酸甲醇提取草莓果实花色苷；(2)摸索最优的色谱条件，包括色谱柱、流动相、流动相梯度等条件；(3)确定质谱条件；(4)按照(2)和(3)的色谱和质谱条件，通过串联飞行时间质谱仪分析草莓果实中花色苷组分；(5)按照(2)的色谱条件，利用花葵素‑3‑葡糖苷绘制标准曲线，用标准曲线法计算花色苷含量。该方法特别适合分离和检测花色苷，具有分辨率高、可靠性高、精密度高和重复性高的特点，且首次从草莓中检测出了芍药素‑3‑葡萄苷、芍药素‑丙二酰葡糖苷和芍药素‑3‑甲基丙二酰葡糖苷。

技术领域

本发明涉及一种利用HPLC-MS/MS测定草莓果实中花色苷组分及含量的方法，属于液相色谱和质谱分析技术领域。

背景技术

花色苷属于水溶性类黄酮，广泛存在于水果和蔬菜中，使植物呈现出蓝色、紫色和红色。花色苷对人体具有多种保健功能，具有预防心血管疾病、控制肥胖和抗肿瘤等功能。草莓果实富含花色苷、色泽亮丽、香气浓郁、营养丰富，被誉为“水果皇后”，栽培面积和产量仅次于葡萄，属于第二大浆果。目前主栽草莓品种均为红色，野生草莓资源中果实颜色较为丰富，存在暗红色、红色、鲜红色、黄色、白色等类型。目前育种家们开始关注以果实颜色为选育目标的草莓品种选育，首次培育出了白色和粉色大果草莓品种，具有一定的新奇性，丰富市场需求。花色苷含量决定草莓果实颜色，草莓果实中花色苷成分复杂，存在多种花色苷单体物质，目前的研究表明不同的草莓资源中花色苷的成分和含量有很大差别，明确草莓果实中花色苷种类和含量是果实颜色种质创新的前提。

目前花色苷的测定方法主要是分光光度测定法和高效液相色谱法。分光光度测定法存在分辨率较低、误差较大、只能测定总花色苷含量、无法确定具体的花色苷成分和构成等缺点，只适合花色苷总含量的初步测定。高效液相色谱法克服了以上缺点，具有很高的灵敏性，同时对花色苷物质纯化和分离有较高的要求。目前高效液相色谱法测定花色苷还存在很大的不足：花色苷成分复杂，分离难度大，需要建立较为复杂的梯度洗脱条件；花色苷提取前处理繁琐，会造成部分花色苷物质丢失，使得一些含量很低的花色苷组分很难检测出来；高效液相色谱法确定具体物质成分时需要有对应的标准对照品，而标准对照品价格极高。目前通常采用连接质谱的HPLC(HPLC-MS/MS)分析花色苷成分，质谱仪可以提供相同保留时间的物质结构信息，推测具体的花色苷类型。因此，选择合适的色谱柱和流动相，摸索出合适的梯度洗脱条件和质谱检测条件，建立一套草莓果实中花色苷分离和检测方法具有很重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种有效提取、分析草莓果实中花色苷成分和含量的方法。

为达到上述目的，本发明提供一种利用HPLC-MS/MS测定草莓果实中花色苷组分及含量的方法，其步骤包括：

(1)取成熟期草莓果实，用锡箔纸包埋后液氮速冻，-80℃冰箱保存备用。

(2)取步骤(1)的草莓果实，液氮充分研磨，精确称取样品0.5g，加入1ml1％盐酸-甲醇(v/v)溶液，避光超声波萃取30min，4℃下12000rpm离心10min，取上清液经0.22um 有机滤膜过滤，即配制成样品溶液。