[发明专利]一种将miRNA转染进猪精子并评估其转染效率的方法在审
| 申请号： | 201710675766.3 | 申请日： | 2017-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN107236822A | 公开（公告）日： | 2017-10-10 |
| 发明（设计）人： | 胡紫惠;马继登;范宇;王誉杰;张进威;龙科任;邱婉玲;刘灿;赵瀚;朱艳;齐婧;李明洲;李学伟 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种将miRNA转染进猪精子并评估其转染效率的方法，主要步骤为将稀释后的新鲜猪精液45度立于CO2培养箱中孵育1小时；用巴氏吸管吸出适量上层精子悬浮液；离心浓缩精子后加入等体积稀释液进行稀释；通过X‑tremeGENE siRNA Transfection转染试剂将miRNA转染进精子，将其放置在17℃保温箱上，转染6小时；通过离心沉淀精子，并使用Trizol LS抽提精子中的Total RNA；对抽提出的Total RNA进行miRNA反转以及相关miRNA的定量。该发明有利于日后进行精子转染miRNA的研究实验。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 mirna 转染 精子 评估 效率 方法 | ||
【主权项】：
一种将miRNA转染进猪精子并评估其转染效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、首先将稀释后的新鲜猪精液45度立于CO2培养箱中孵育1h，接着用巴氏吸管吸出适量上层精子悬浮液，通过离心浓缩精子，然后加入等体积的稀释液进行稀释；B、使用X‑tremeGENE siRNA Transfection Reagent转染试剂将miRNA转染进精子，将其放置于17℃保温箱上，转染6h；C、通过离心沉淀精子，然后使用Trizol LS抽提精子中的Total RNA；D、对抽提出的Total RNA进行miRNA反转录以及相关miRNA的定量，并对精子的转染效率进行评估。
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