[发明专利]一种微生物杀虫剂的制备方法

摘要

本发明涉及农用微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种微生物杀虫剂的制备方法，具体步骤为，步骤1伯克氏霍尔德菌属细菌斜面培养；步骤2伯克氏菌属摇瓶培养；步骤3伯克氏霍尔德菌属细菌种子培养；步骤4伯克氏霍尔德菌属细菌发酵培养，本发明的微生物杀虫剂依附于植物体生长健全生育过程；可以分解连续种植田地中积畜的有害物质用于植物虫害防控，具有生物防治、促进植物生长和生物修复等功能。伯克氏霍尔德菌属细菌能产生多种具有抗菌活性的代谢产物如铁载体、吩嗪、硝吡咯菌素、苯基吡咯、单萜生物碱、Cepaciamide A、CepacidineA、Cepacin A等。现已应用于生物防治，分解有毒物质等领域。

主权项

一种伯克氏霍尔德菌属细菌发酵方法，其特征在于，包含如下步骤：步骤 1：伯克氏霍尔德菌属细菌斜面培养将伯克氏霍尔德菌属细菌接种于斜面培养基进行斜面培养，接种质量百分比为5～10％，所述斜面培养温度为 28℃～ 32℃，时间为 24h ～ 48h，所述斜面培养基中各组分的质量百分比为：氯化钠 0.5%，蛋白胨 0.5% ～ 1%，琼脂粉 1.8% ～ 2%，其余为水，将 pH 值调整至 6.5 ~ 7.5；步骤 2：伯克氏霍尔德菌属细菌摇瓶培养将步骤 1得到培养液接种于摇瓶培养基中进行摇瓶培养，接种质量百分比为5～10％，所述摇瓶培养温度为28℃～ 32℃，时间为 24h ～ 36h，转速为 180rpm ～ 220rpm，所述摇瓶培养基中各组分的质量百分比为：磷酸氢二钾 0.2%，牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，其余为水，将 pH值调至6.5 ~ 7.5；步骤 3：伯克氏霍尔德菌属细菌种子培养将步骤 2得到的培养液接种于种子培养基中进行种子培养，所述种子培养温度为 28℃～ 32℃，时间为 24h ～ 48h，搅拌转速为 200rpm，接种质量百分比为 1% ～ 2%，每分钟通入的空气体积和发酵液体积之比为0.5:1 ~ 1:1，所述种子培养基中各组分的质量百分比为：磷酸氢二钾0.2%，牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，其余为水，将 pH值调至 6.5 ~ 7.5，装料系数为 0.5 ~0.8；步骤 4：伯克氏霍尔德菌属细菌发酵培养将步骤 3得到的培养液接种于发酵培养基中进行发酵培养，所述发酵培养的温度为28℃～ 32℃，时间为 24h ～48h，接种质量百分比为 1% ～ 2%，起始搅拌转速为 200rpm，当溶解氧低于20% 时增加搅拌转数和通气量，维持溶氧在 20% 以上，当发酵液中菌体数量≥ 5×108cfu/ml时发酵结束，将发酵罐液体排出，装料系数为 0.5 ~ 0.8；步骤 5：将步骤4得到的发酵液进行离心，将沉淀物烘干，粉碎即得；步骤 4中所述发酵培养基中各组分的质量百分比为：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，石菖蒲提取物0.4%，桑叶提取物0.4%，消泡剂0.005% ～ 0.02%，其余为水，将 pH 值调整到 7.0。