[发明专利]一种微生物杀虫剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及农用微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种微生物杀虫剂的制备方法。

背景技术

植物病虫害是农业生产的大敌，据联合国粮农组织(FAO)统计每年因植物遭受病害造成的减产平均损失为总产量的15％～20％。长期以来，用于防治或扑灭农田害虫制剂一般均为化学农药，如六六六、敌敌畏等。长期频繁使用化学农药，导致害虫抗药性的出现，使化学农药的效力逐渐降低。目前，主要解决方式是加大用药量，直接导致农业成本提高；害虫抗药性加强，防治难度加大；天敌被杀死，生态平衡遭到破坏；毒害物质在农副产品中残留、积累，危害广大人民的身体健康。因此，寻找广谱、高效、低毒的生物农药已成为科研人员及农药使用人员的共识。

微生物杀虫剂是利用微生物活体或其代谢产物来防治害虫的。它具有特异性强，防治效果好，对人畜安全，不破坏生态平衡，害虫不易产生抗药性等优点。目前的微生物杀虫剂主要包含三类：1、细菌类杀虫剂：细菌杀虫剂是应用最早的微生物杀虫剂，根据对昆虫致病性的不同，分为转性病原体、碱性病原体和潜势病原体。目前被开发成产品投入实际使用的主要有4种：伯克氏霍尔德菌属、球形芽孢杆菌、日本金龟子芽孢杆菌和缓病芽孢杆菌，其中伯克氏霍尔德菌属能有效抑制病原菌在植物表面的存活，显著提高作物抗病能力，促进作物生长。2、真菌类杀虫剂：真菌类杀虫剂种类繁多，目前记载的约有800多种，其中大部分是兼性或转性病原体，研究应用较多的有白僵菌、绿僵菌、拟青霉菌、轮枝菌等。但其生长和繁殖在很大程度上受外界条件的限制，在实际应用中收到环境限制。3、病毒类杀虫剂：昆虫病毒的感染途径主要有食入感染和皮肤感染，目前该类制剂正处于研发阶段，工业化生产还不成熟。

综上，现有的微生物杀虫剂在实际应用过程中应用范围较为单一，菌种间的拮抗作用强，杀虫谱较窄；在工业化应用和环境适应性、抗逆性等方面现有产品也存在诸多不足，限制了微生物制剂在农作物杀虫上的广泛应用。

发明内容

本发明的目的是通过菌种选育和发酵工艺优化，设计出一种工业化微生物杀虫剂的生产方法，即利用伯克氏霍尔德菌属作为生产菌株，应用本发明所设计的工艺方案和优化的培养基配方，增强产品的杀虫性能，并扩展其实际应用范围。

为实现上述的发明目的，本发明的技术方案如下：

一种伯克氏霍尔德菌属细菌发酵方法，其包含如下步骤：

步骤1：将伯克氏霍尔德菌属细菌接种于斜面培养基进行斜面培养；

步骤2：将步骤1得到培养液接种于摇瓶培养基中进行摇瓶培养；

步骤3：将步骤2得到的培养液接种于种子培养基中进行种子培养；

步骤4：将步骤3得到的培养液接种于发酵培养基中进行发酵培养；

步骤5：将步骤4得到的发酵液进行离心，将沉淀物；烘干，粉碎即得。

优选的，所述伯克氏霍尔德菌属细菌发酵方法，其包含如下步骤：

步骤1：伯克氏霍尔德菌属细菌斜面培养

将伯克氏霍尔德菌属细菌接种于斜面培养基进行斜面培养，接种质量百分比为5～10％，所述斜面培养温度为28℃～32℃，时间为24h～48h，所述斜面培养基中各组分的质量百分比为：氯化钠0.5％，蛋白胨0.5％～1％，琼脂粉1.8％～2％，其余为水，将pH值调整至6.5～7.5；

步骤2：伯克氏霍尔德菌属细菌摇瓶培养

将步骤1得到培养液接种于摇瓶培养基中进行摇瓶培养，接种质量百分比为5～10％，所述摇瓶培养温度为28℃～32℃，时间为24h～36h，转速为180rpm～220rpm，所述摇瓶培养基中各组分的质量百分比为：磷酸氢二钾0.2％，牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，其余为水，将pH值调至6.5～7.5；

步骤3：伯克氏霍尔德菌属细菌种子培养

将步骤2得到的培养液接种于种子培养基中进行种子培养，所述种子培养温度为28℃～32℃，时间为24h～48h，搅拌转速为200rpm，接种质量百分比为1％～2％，每分钟通气比(空气体积：发酵液体积)为0.5:1～1:1，所述种子培养基中各组分的质量百分比为：磷酸氢二钾0.2％，牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，其余为水，将pH值调至6.5～7.5，装料系数为0.5～0.8；

步骤4：伯克氏霍尔德菌属细菌发酵培养