[发明专利]一种海带多糖‑铬配合物的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种海带多糖‑铬配合物的制备方法及其应用，所述海带多糖‑铬配合物由纯化后的海带多糖与铬在一定条件下自组装反应形成配合物，并经分离纯化而成。动物活性实验表明，海带多糖‑铬配合物能提高小鼠机体的抗氧化能力和免疫调节能力。因而可用于制备抗衰老、免疫调节剂的药物和保健食品。

主权项

一种海带多糖‑铬配合物的制备方法，其特征在于：海带多糖与铬在一定条件下自组装反应形成配合物，具体包括如下步骤：（1）海带粗多糖的提纯（A）胰蛋白酶液的制备：取1g胰蛋白酶，用pH5.8的NaHPO3‑NaH2PO3缓冲液溶解，精确定容至100ml，酶液终浓度为l0mg/ml，pH5.98；（B）取100ml浓度为100mg/ml的海带粗多糖液和40ml的胰蛋白酶液混合，37℃水浴5h后加入28ml pH7.0的10wt％H2O2溶液反应过夜，次日，加入42ml的sevage溶液，放在磁力搅拌仪上剧烈震荡20min，装入离心管中以4000r/min破乳后倒入分液漏斗中静置分层，弃去下层有机相及中间蛋白质层，再取上层水相加入42ml sevage溶液，重复以上操作直至中间界面无杂蛋白为止；（C）在步骤（B）去蛋白后的多糖滤液中加入两倍体积量的无水乙醇，静置12 h后倒入离心管以3500 r/min的转速离心10min后取沉淀，沉淀分别用95wt％的乙醇、无水乙醇、丙酮各清洗3遍，醇沉洗涤后滤渣加适量蒸馏水，充分复溶后移入透析袋中，放入蒸馏水中透析24 h，透析完毕后向糖液中加入两倍体积量的乙醇醇沉，离心取其沉淀部分同样用乙醇和丙酮洗涤后放入冷冻干燥机中干燥，干燥后得海带多糖纯品；（2）海带多糖‑铬配合物的制备取2.0 g纯化后的海带多糖溶于100ml 去离子水，70℃水浴，边搅拌边滴加1mol/L CrCl3溶液，滴至有浑浊出现，再滴加3‑5滴后即停止滴加，滴加过程中维持溶液的pH9，然后让反应液继续70℃水浴保温1h，取出反应液，冷却至室温后倒入离心管中以6000r/min转速离心8min，取上清液，加入两倍体积量95wt%乙醇一段时间后再次离心，取沉淀，沉淀用无水乙醇、丙酮洗涤后冷冻干燥，得到海带多糖‑铬配合物的粗品；（3）海带多糖‑铬配合物的纯化将海带多糖‑铬配合物粗品用少量去离子水完全溶解后装入透析袋除盐，透析24h后，取出透析袋内的溶液并加入两倍体积量的95wt%乙醇，放置一段时间使海带多糖‑铬配合物充分析出后离心，收集沉淀，用无水乙醇、丙酮洗涤，最后冷冻干燥得到纯化后的海带多糖‑铬配合物。