[发明专利]Klenow酶及其表达纯化方法有效
| 申请号： | 201710592821.2 | 申请日： | 2017-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN107177568B | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 周俊;钟淑瑶;章瑞程;邓艳华 | 申请（专利权）人： | 菲鹏生物股份有限公司;广东菲鹏生物有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/70 |
| 代理公司： | 44224 广州华进联合专利商标代理有限公司 | 代理人： | 徐春祺 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南山区西丽留*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种Klenow酶及其表达纯化方法，通过对含有Klenow酶表达片段的重组工程菌进行诱导培养，并收集诱导培养后的菌体。然后将菌体裂解，得到含有目的蛋白(Klenow酶)的裂解液。在进行Ni离子亲和柱纯化之前，向裂解液中加入阳离子聚合物进行聚合沉降反应，然后向聚合沉降反应后收集的上清液中加入蛋白沉淀剂盐析沉降目的蛋白，从而得到粗产物。粗产物中核酸残留少、杂质少，对Ni离子亲和柱纯化过程的影响较小。这种表达纯化的方法操作简便、快速、成本低，适应于大批量的生产，表达纯化获得的Klenow酶纯度高，满足二代测序对于Klenow酶的纯度要求。 | ||
| 搜索关键词： | klenow 及其 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种Klenow酶的表达纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：/n对含有Klenow酶表达片段的重组工程菌进行诱导培养，并收集所述诱导培养后的菌体；/n将所述菌体裂解，得到裂解液；/n向所述裂解液中加入阳离子聚合物进行聚合沉降反应，固液分离后收集上清液，所述阳离子聚合物为聚乙烯亚胺，所述聚乙烯亚胺与所述裂解液的质量比为0.1~1:100；/n向所述上清液中加入蛋白沉淀剂，盐析沉降后得到粗产物；以及/n利用Ni离子亲和柱纯化所述粗产物，得到所述Klenow酶。/n
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