[发明专利]一种利用牛乳检测奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的方法

摘要

一种利用牛乳检测奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的方法，本发明涉及一种利用牛乳检测奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的方法。本发明的目的是为了解决现阶段检测原乳的乳蛋白率和乳脂率方法不能准确和全面地反映不同奶牛品种和个体的乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的问题。本发明方法为：一、牛乳的预处理；二、牛乳外泌体的制备；三、检测GlyRS和CAP1含量；四、奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力＝GlyRS含量/CAP1含量。本发明的GlyRS含量/CAP1含量可以反映乳腺合成乳蛋白和乳脂肪的能力，同时可以排除因其他因素对乳蛋白率和乳脂率的影响而不能有效判断乳腺合成能力的问题。本发明可应用于奶牛饲养领域。

主权项

1.一种利用牛乳检测奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的方法，其特征在于该方法为：一、牛乳的预处理：取牛乳于‑80℃冻存备用，得到牛乳样品；二、牛乳外泌体的制备：将牛乳样品于0‑4℃、2000‑2500rpm的条件下离心25‑30min，去除沉淀的细胞和漂浮的脂肪球，得到脱脂乳；将脱脂乳于0‑4℃、12000‑13000rpm的条件下离心30‑40min，取上清；将上清于0‑4℃、100000‑110000rpm的条件下离心2‑2.5h，取沉淀；将沉淀用0.01‑0.02M的PBS溶解，得到外泌体初次溶液；将外泌体初次溶液于0‑4℃、100000‑110000rpm的条件下离心2‑2.5h，取沉淀，将沉淀用0.01‑0.02M的PBS溶液溶解，得到外泌体溶液，检测外泌体溶液纯度，合格后进行下一步操作；其中牛乳样品与0.01‑0.02M的PBS溶液的体积比为1:20；三、取外泌体溶液15‑20μl用于Western blotting检测；检测蛋白为：GlyRS和CAP1，根据Western blotting的灰度扫描结果，利用Image‑Pro Plus图像分析软件进行分析，得到GlyRS含量和CAP1含量；四、奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力＝GlyRS含量/CAP1含量，GlyRS含量/CAP1含量＞0。