[发明专利]一种利用牛乳检测奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的方法

说明书

一种利用牛乳检测奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的方法，本发明涉及一种利用牛乳检测奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的方法。本发明的目的是为了解决现阶段检测原乳的乳蛋白率和乳脂率方法不能准确和全面地反映不同奶牛品种和个体的乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的问题。本发明方法为：一、牛乳的预处理；二、牛乳外泌体的制备；三、检测GlyRS和CAP1含量；四、奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力＝GlyRS含量/CAP1含量。本发明的GlyRS含量/CAP1含量可以反映乳腺合成乳蛋白和乳脂肪的能力，同时可以排除因其他因素对乳蛋白率和乳脂率的影响而不能有效判断乳腺合成能力的问题。本发明可应用于奶牛饲养领域。

技术领域

本发明涉及一种利用牛乳检测奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的方法。

背景技术

乳品质主要指乳蛋白率和乳脂率，是牛乳的重要经济指标。优良的牛乳具有较高的乳蛋白率和乳脂率，具有更好的乳品加工特性，因此市场价格也较高。在同样的饲养营养环境下，不同品种奶牛和同一品种奶牛的不同个体所生产的原乳的乳蛋白率和乳脂率却相差很大，乳腺合成乳蛋白、乳脂肪的能力是反映不同奶牛品种和个体乳腺的产乳品质差异的重要指标。乳腺合成乳蛋白、乳脂肪的能力由乳腺泌乳的基本单元乳腺上皮细胞中调控乳蛋白和乳脂肪合成的关键基因决定，乳腺细胞中这些基因表达的蛋白是重要的信号分子，能够响应奶牛机体刺激乳腺泌乳的氨基酸等营养信号、催乳素和雌激素等激素信号、生长因子等信号，调控乳蛋白和乳脂肪形成。这些功能基因表达的差异反映了乳腺上皮细胞合成乳蛋白、乳脂肪能力的差异。

因此筛选乳蛋白率和乳脂率高的奶牛品种和个体是奶牛营养和遗传育种的重要任务之一。目前尚没有筛选乳蛋白率和乳脂率高的奶牛品种和个体的有效方法。通过检测原乳的乳蛋白率和乳脂率可以部分反映奶牛品种和个体生产原乳品质的差异，但由于乳蛋白率和乳脂率的差异除与乳腺的合成乳蛋白、乳脂肪等的能力有关外，还可能与泌乳量的不同、奶牛瘤胃微生物的代谢差异、肝脏生物转化的差异、所取牛乳样品的差异等有关，因此单纯检测原乳的乳蛋白率和乳脂率难以准确和全面地反映不同奶牛品种和个体的乳腺的合成乳蛋白和乳脂肪的能力。

发明内容

本发明的目的是为了解决现阶段检测原乳的乳蛋白率和乳脂率方法不能准确和全面地反映不同奶牛品种和个体的乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的问题，提供了一种利用牛乳检测奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的方法。

本发明一种利用牛乳检测奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力的方法：一、牛乳的预处理：取牛乳于-80℃冻存备用，得到牛乳样品；二、牛乳外泌体的制备：将牛乳样品于0-4℃、2000-2500rpm的条件下离心25-30min，去除沉淀的细胞和漂浮的脂肪球，得到脱脂乳；将脱脂乳于0-4℃、12000-13000rpm的条件下离心30-40min，取上清；将上清于0-4℃、100000-110000rpm的条件下离心2-2.5h，取沉淀；将沉淀用0.01-0.02M的PBS溶解，得到外泌体初次溶液；将外泌体初次溶液于0-4℃、100000-110000rpm的条件下离心2-2.5h，取沉淀，将沉淀用0.01-0.02M的PBS溶液溶解，得到外泌体溶液，检测外泌体溶液纯度，合格后进行下一步操作；其中牛乳样品与0.01-0.02M的PBS溶液的体积比为1:20；三、取外泌体溶液15-20μl用于Western blotting检测；检测蛋白为：GlyRS和CAP1，根据Western blotting的灰度扫描结果，利用Image-Pro Plus图像分析软件进行分析，得到GlyRS含量和CAP1含量；四、奶牛乳腺合成乳蛋白和乳脂肪能力＝GlyRS含量/CAP1含量，GlyRS含量/CAP1含量＞0。