[发明专利]一种尖吻蝮蛇凝血酶重组蛋白的表达方法在审
| 申请号： | 201710556935.1 | 申请日： | 2017-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN107267492A | 公开（公告）日： | 2017-10-20 |
| 发明（设计）人： | 邓沁;沈潇;苏薇薇;吴忠;彭维;王永刚 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64;C12N15/85;C12N15/57 |
| 代理公司： | 广州番禺容大专利代理事务所(普通合伙)44326 | 代理人： | 刘新年,黄开艳 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种尖吻蝮蛇凝血酶重组蛋白的表达方法。该方法包括如下步骤(1)优化尖吻蝮蛇凝血酶基因(2)PCR扩增优化后的尖吻蝮蛇凝血酶基因；(3)构建Agkis‑pMCX表达载体，将质粒转化大肠杆菌感受态细胞中扩增，经Amp抗性筛选出阳性克隆，进行测序，提取测序正确的重组质粒；(4)将重组质粒转染至CHO细胞；(5)重组蛋白表达鉴定。本发明是首次利用无血清悬浮式培养的CHO细胞表达一种重组尖吻蝮蛇凝血酶，运用生物工程手段，较成功地解决了蛇毒产品原料来源不足、质量不稳定的实际生产问题。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 蝮蛇 凝血酶 重组 蛋白 表达 方法 | ||
【主权项】：
一种尖吻蝮蛇凝血酶重组蛋白的表达方法，依次包括尖吻蝮蛇凝血酶基因优化、优化基因PCR扩增、表达载体构建、重组质粒转染及重组蛋白表达鉴定步骤，其特征在于：所述的表达载体构建方法为将回收的PCR产物与pMCX克隆载体酶切连接，构建Agkis‑pMCX质粒，将Agkis‑pMCX质粒转化大肠杆菌感受态细胞中扩增，经Amp抗性筛选出阳性克隆，进行测序；提取测序正确的重组质粒；所述的重组质粒转染方法为将重组质粒转染至CHO细胞，其中包含蛋白质基因全长的重组质粒单独转染，含A亚基基因序列和B亚基基因序列的重组质粒共转染至CHO细胞。
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