[发明专利]一种等温核酸扩增的方法

摘要

本发明公开了一种等温核酸扩增的方法，所述方法在恒定的温度下进行，首先上游引物与靶标退火，然后在聚合酶的作用下延伸产生扩增靶标，同时利用双链间的动态解离原理使下游引物与扩增靶标退火，再在聚合酶的作用下延伸得到双链扩增产物，产生的双链扩增产物与带有酶切识别位点的引物退火，并在聚合酶的作用下延伸得到具有酶切识别位点的扩增产物，该产物在具有酶切功能的酶的作用下切割或切刻形成新的产物可重新作为另一个循环的底物，不断循环扩增，从而引发指数扩增。本发明的方法操作简单，反应迅速，只需要三条引物，一种聚合酶，一种具有酶切功能的酶，等温条件下即可完成扩增。

主权项

1.一种等温核酸扩增的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)等温核酸扩增引物组引物包括：上游引物P1、下游引物P2、一条带有具有酶切识别位点的特异性引物P3；(2)步骤(1)中的两条上游引物P1、下游引物P2与靶核酸序列杂交，在聚合酶的作用下延伸，所得扩增产物在反应温度下发生动态解离，两条引物侵入扩增产物形成指数式扩增，得到扩增产物，扩增产物在反应温度下动态解离；(3)步骤(2)或步骤(4)的动态解离产物与带有具有酶切识别位点的特异性引物P3结合，在聚合酶的作用下延伸得到带有酶切识别位点的扩增产物；(4)步骤(3)得到的带有酶切识别位点的扩增产物在具有酶切功能的酶的作用下切割或切刻，酶切产物在反应温度下双链间发生动态解离。