[发明专利]耐热聚合酶的优化方法及其优化组合物和应用

摘要

本发明公开了一种耐热聚合酶的优化方法，其包括下列步骤：①可优化的耐热聚合酶及其活性单位：根据DNA产物量随聚合酶浓度增大变化的曲线来选择；②确定优化剂纳米金的用量：得到具有有效优化作用的纳米金的用量与耐热聚合酶活性单位用量之间的比例；③耐热聚合酶的优化：根据步骤②比例来混合耐热聚合酶及纳米金。本发明还提供了由该方法制得的一种优化的耐热聚合酶组合物。本发明通过非基因工程手段优化现有聚合酶，使其类似甚至超越基因工程手段改造的聚合酶，具有同时提高聚合酶多种特性、优化方式简便、成本低廉的优点，可应用于各种PCR反应，特别是复杂的转基因植物检测反应。

主权项

1. 一种耐热聚合酶的优化方法，其包括下列步骤：①选择可优化的耐热聚合酶及其活性单位：对一定体积的PCR反应，测定耐热聚合酶不同浓度时生成DNA产物的量，选择DNA产物量随聚合酶浓度增大变化的曲线具有先上升后下降特点的耐热聚合酶，并选择大于等于该聚合酶最佳浓度的活性单位进行优化；②确定优化剂纳米金的用量：在步骤①所述大于等于该聚合酶最佳浓度的活性单位范围中选择的任一特定的聚合酶活性单位下，以同一浓度的模板进行PCR扩增，比较不同量的同种纳米金处理的聚合酶对扩增结果的影响，得到具有有效优化作用的纳米金的用量与耐热聚合酶活性单位用量之间的比例；③耐热聚合酶的优化：根据实际PCR反应所需的耐热聚合酶活性单位用量，加入步骤②中所述比例用量的纳米金。