[发明专利]基于胶原海绵‑纳米纤维素的三维细胞支架的制备方法

摘要

本发明公开了一种基于胶原海绵‑纳米纤维素的三维细胞支架的制备方法，其特征在于经过胶原海绵的制备、纳米纤维素的制备、胶原海绵‑纳米纤维素的制备和培养步骤，完成基于胶原海绵‑纳米纤维素的三维细胞支架的制备方法；本发明提供的基于胶原海绵‑纳米纤维素的三维细胞支架的制备方法，结果可靠、操作简便、可重复性强，能够长时间有效促进细胞的三维生长及增殖，同时对各类人体三维微组织的生成，尤其是对肝癌组织功能的形成有一定的作用，从而能够为肝组织工程的科学研究以及肝癌的临床治疗提供有益的参考。

主权项

基于胶原海绵‑纳米纤维素的三维细胞支架的制备方法，其特征在于：经过胶原海绵的制备、纳米纤维素的制备、胶原海绵‑纳米纤维素的制备和培养步骤，完成基于胶原海绵‑纳米纤维素的三维细胞支架的制备方法；具体步骤如下：（1）胶原海绵的制备：除脂，分离牛蹄筋、猪蹄、鱼皮、软骨、肌腱或皮肤组织在胃蛋白酶的醋酸溶液中消化完全，最后透析冻干得到胶原海绵；（2）纳米纤维素的制备：将纸浆粉碎后溶于蒸馏水中得到浆纸溶液，然后向浆纸溶液中加入一定量的TEMPO/NaBr充分混匀，然后加入NaClO氧化，反应结束后离心去除上层液体，并离心洗涤数次，将下层纳米纤维素溶于水溶液中超声分散得到纳米纤维素分散液；（3）胶原海绵‑纳米纤维素的制备：将纳米纤维素与胶原海绵进行混合，在800‑1000r/min转速下充分搅拌混匀，然后将混合液放入容器中预冻4小时，然后取出放于冷冻干燥机中继续冻干48小时，得到胶原海绵‑纳米纤维素；（4）培养：将胶原海绵‑纳米纤维素称重后放于48孔板，将293A、HUVEC、BMSC、U87和HepG2这5种细胞均匀生物打印于支架上，然后在10%FBS培养液中培养14天，取样检测，完成基于胶原海绵‑纳米纤维素的三维细胞支架的制备。