[发明专利]一种等温快速扩增检测食品中致病菌的方法

摘要

本发明公开了一种等温快速扩增检测食品中致病菌的方法，属于食品安全检测技术领域。本发明通过多重序列对比确定了针对各菌的检测靶核酸，设计了特异性的分子信标探针和引物，以各菌株基因组DNA为模板，建立了实时荧光CSDPR，进行等温核酸扩增，并且验证了CSDPR方法的特异性、灵敏度和最低检测限，还通过实际样品的检测确定了本发明建立的方法具有实际可行性。本发明方法对于食品中的多种致病菌的检测具有通用性，包括金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌、志贺氏菌等，仅需替换掉分子信标探针中的特定部分，即可实现对不同致病菌的有效检测，而且检测灵敏度、特异性高，原理与操作简单，样品前处理简单。

主权项

一种快速检测食品中致病菌的方法，其特征在于，所述方法是以含有致病菌目标序列的DNA为模板，配置实时荧光循环链置换聚合酶反应(CSDPR)反应体系，置于荧光分光光度计中，在分子信标探针和循环引物的作用下进行恒温扩增，根据扩增曲线及荧光增强速率实现食品中致病菌的定性或者定量检测；其中，分子信标探针的核苷酸序列(5’‑3’)由A、B、C三部分依次组成，A和C逆序配对，B为与目标序列互补配对的致病菌探针环序列。