[发明专利]一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法及其应用与试剂盒

摘要

本发明公开了一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法及其应用与试剂盒，其涉及生物技术领域。本发明用于确定在接受器官移植的病人体内是否产生了导致慢性器官排斥的抗体，试剂盒用于检测具有致病性的特异性抗供者抗体。本发明是将器官受者的血清加入与供者组织相容抗原相同的血管内皮细胞培养物内，在摄氏温度35℃‑37℃下培育后测定血管内皮细胞的反应。试验结果揭示了器官移植受者与供者之间高度特异且精准的相互作用，为早期发现器官排异反应并制定早期治疗方案提供了病理学依据。不需活检材料，为临床医师提供了一种定期监视接受器官移植病人的有力、有效且十分经济的手段。

主权项

1.一种功能性地检测抗体介导的器官排异方法的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括阳性对照血清、阴性对照血清、阳性标准品、空白试剂、再构细胞板、培养液、汉氏磷酸缓冲液、羊血清/磷酸缓冲液、聚甲醛、羊抗ICAM‑1抗体、抗羊FITC标记抗体、白蛋白溶液；其中，所述的阳性标准品、培养液、羊血清/磷酸缓冲液、聚甲醛、白蛋白溶液的组分及配比如下：阳性标准品：0.1ng/mL肿瘤坏死因子－A；培养液：EGM‑2培养液，EGM‑2培养液内含HAM’氏12培基、生长因子添加物；羊血清/磷酸缓冲液：体积比10％；聚甲醛：体积比4％；白蛋白溶液：重量比1％；所述方法的步骤如下：(1)依据病人血样中要鉴定DSA的分型，在细胞库内选择表达与DSA类型相对应的人类白细胞组织相容抗原的血管内皮细胞；(2)将所述血管内皮细胞种植在96‑孔细胞培养微孔板的底部，每孔含3000‑4000活细胞，所述种植活细胞的微孔板定义为再构细胞板；(3)向测试的每孔内加入病人血清，在一定条件下孵育一段时间；(4)收集再构细胞板孔内的上清液，测定血管内皮细胞与血清反应后释放的生物活性细胞因子；(5)用体积比4％聚甲醛固定种植在再构细胞板的底部血管内皮细胞，采用免疫荧光组化的方法分析细胞表面粘附分子；(6)准备试剂盒；(7)参考试剂盒内提供的阳性与阴性对照血清数值，用于确定病人血清与血管内皮细胞的反应幅度。