[发明专利]肠道细菌抗生素抗性基因的定量检测方法有效
| 申请号： | 201710374609.9 | 申请日： | 2017-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN107254518A | 公开（公告）日： | 2017-10-17 |
| 发明（设计）人： | 黄志坚;曾燊正;刘健;侯冬伟;何建国 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/10;C12R1/01 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了一种肠道细菌抗生素抗性基因的定量检测方法。包括如下步骤：S1.提取肠道细菌总DNA；S2.以肠道细菌总DNA为模板，PCR扩增抗生素抗性基因和16S rRNA基因，将扩增产物连接至克隆载体，然后转化宿主菌，获得阳性克隆；将阳性克隆扩繁后抽提质粒，测定其拷贝浓度，10倍梯度稀释成标准品模板，通过荧光定量PCR检测建立拷贝数与Ct值之间的标准曲线；S3.将阳性质粒和样品进行荧光定量PCR扩增，计算样品中携带的抗生素抗性基因拷贝数，得到抗生素抗性基因的相对含量。本发明方法安全环保，价格低廉，步骤简单，耗时短，结果稳定可靠，重复性好，灵敏度高，实用性强，简便快速，具有十分广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 肠道 细菌 抗生素 抗性 基因 定量 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种肠道细菌抗生素抗性基因的定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.提取肠道细菌总DNA；S2.以肠道细菌总DNA为模板，PCR扩增抗生素抗性基因和16S rRNA基因，将扩增产物连接至克隆载体，然后转化宿主菌，获得阳性克隆；将阳性克隆扩繁后抽提质粒，测定其拷贝浓度，10倍梯度稀释成标准品模板，通过荧光定量PCR检测建立拷贝数与Ct值之间的标准曲线；S3.将阳性质粒和样品进行荧光定量PCR扩增，计算样品中携带的抗生素抗性基因拷贝数，得到抗生素抗性基因的相对含量。
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