[发明专利]滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法及其活性制品

摘要

本发明提供一种滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法及其活性制品，能够充分利用滇橄榄资源，提供一种高效率、低成本、纯度高且易于推广的滇橄榄多酚活性物质制备方法，并提供一种具有抗疲劳功能的活性制品。

主权项

一种滇橄榄多酚的高浓缩发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）原料预处理：滇橄榄的新鲜果实为原料，用水清洗干净，放入含0.1％柠檬酸的沸水中热烫4min，冷却，破碎去核，加1∶1的水打浆，果浆经真空干燥，粉碎过40目筛得滇橄榄果肉粉；（2）将步骤（1）制得滇橄榄果肉粉按料液比1:4接种于液体发酵培养基中，在温度22℃的条件下，液体发酵培养3‑6天，然后加入裂壶藻发酵蛋白产物以及植物内生菌，使裂壶藻发酵蛋白产物的浓度为0.15‑0.85mg/mL，植物内生菌的浓度为1.9×106CFU/ml‑4.6×107CFU/ml然后继续培养1‑4天，分离，得到滇橄榄果肉粉发酵液；（3）从步骤（2）制得的发酵液中提取滇橄榄多酚；所述步骤（2）中的液体发酵培养基，每升组分如下：3g乳糖、2g糖蜜、2g豆粕粉、1.5g蛋白胨，0.1gMgSO4、0.03gCaCl2、0.1gKH2PO4、0.1gK2HPO4；所述裂壶藻发酵产物的制备方法为：取经过清洗的裂壶藻原料，设定酶解条件为料液比1∶10（m/V）、纤维素酶CellulaseACCF‑4740添加量2%、温度55℃、pH4.5、反应时间1.3h，进行酶解，纤维素酶水解结束后，沸水浴灭酶15min，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻纤维素酶水解液；裂壶藻酶解液灭酶活后，调节pH值至6.2‑6.6，高压蒸汽灭菌（121℃，20min），然后接种体积分数1%的MRS培养基活化的戊糖片球菌液到裂壶藻酶解液，37℃恒温培养箱静置，进行发酵；发酵结束后，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻发酵产物；所述植物内生菌的提取方法为：采用组织块法，取新鲜反枝苋的根、茎、叶分别洗净至没有明显的杂质，，表面消毒处理后，接种至PDA（分离内生真菌）和高氏一号培养基（分离内生放线菌）上培养7‑10d，然后分离单菌落；从活化斜面中挑取菌丝块接种于装有100mL发酵培养基的锥形瓶中，置28℃，200r/min摇床振荡培养7d；发酵培养物除去菌体，滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，55℃减压浓缩蒸干，即为菌液粗提物；离心和过滤得到的菌体，用适量95%乙醇冷凝回流3次，合并乙醇相，减压浓缩蒸干，即为菌体粗提物；置4℃冰箱保存备用。