[发明专利]一种轴向单分子高精度定位方法和装置在审
申请号: | 201710341359.9 | 申请日: | 2017-05-16 |
公开(公告)号: | CN108872164A | 公开(公告)日: | 2018-11-23 |
发明(设计)人: | 贾策;徐涛;付彦辉;张翔;纪伟;罗志勇 | 申请(专利权)人: | 中国科学院生物物理研究所 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64;G02B21/00;G02B21/36 |
代理公司: | 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙) 51241 | 代理人: | 曹少华 |
地址: | 100101*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明属于超分辨定位荧光成像技术领域,涉及一种轴向单分子高精度定位的荧光定位方法装置及其使用方法。本发明结合单分子定位的高精度特点,利用单分子轴向高斯光强分布响应曲线在焦点处斜率最大的特性,实现了单分子轴向的精确定位,继而实现了超分辨荧光成像。本发明包括激光器A、激光器B、物镜、三维样品位移台、轴向定位系统等;激光器A和激光器B用于对荧光分子的激发和激活。其中轴向定位系统由分光棱镜、透镜和EMCCD组成,荧光进入轴向定位系统后,经透镜后成像在EMCCD处;EMCCD位置相对焦点是对称的。 | ||
搜索关键词: | 激光器 单分子 轴向 轴向定位系统 透镜 高精度定位 超分辨 荧光 荧光成像技术 单分子定位 方法和装置 样品位移台 分光棱镜 位置相对 响应曲线 荧光成像 荧光分子 高斯光 焦点处 物镜 成像 对称 三维 激活 焦点 激发 | ||
【主权项】:
1.一种轴向单分子高精度定位方法,其特征在于:(a)首先将实验样品的位置调整到显微镜物镜焦平面上;(b)然后激光A低能量照射实验样品表面,激活出焦面处的几个荧光分子,激光B照射样品激发出荧光分子,位移台在焦面处上下各移动200nm,EMCCD记录下各处图像,再使用激光B长时间照射样品对荧光分子进行漂白,之后分别用激光A和激光B来激活和漂白其他的荧光分子,并进入下一个循环,当循环持续上百次后,得到样品内荧光分子在轴向的图像;(c)将得到的图像进行高斯光强拟合,根据轴向高斯光强分布响应曲线进行曲线拟合,通过曲线拟合斜率计算得到荧光分子的精确位置。
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