[发明专利]一种轴向单分子高精度定位方法和装置在审
| 申请号： | 201710341359.9 | 申请日： | 2017-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN108872164A | 公开（公告）日： | 2018-11-23 |
| 发明（设计）人： | 贾策;徐涛;付彦辉;张翔;纪伟;罗志勇 | 申请（专利权）人： | 中国科学院生物物理研究所 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G02B21/00;G02B21/36 |
| 代理公司： | 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙) 51241 | 代理人： | 曹少华 |
| 地址： | 100101*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 激光器 单分子 轴向 轴向定位系统 透镜 高精度定位 超分辨 荧光 荧光成像技术 单分子定位 方法和装置 样品位移台 分光棱镜 位置相对 响应曲线 荧光成像 荧光分子 高斯光 焦点处 物镜 成像 对称 三维 激活 焦点 激发 | ||
【权利要求书】：
1.一种轴向单分子高精度定位方法，其特征在于：
(a)首先将实验样品的位置调整到显微镜物镜焦平面上；
(b)然后激光A低能量照射实验样品表面，激活出焦面处的几个荧光分子，激光B照射样品激发出荧光分子，位移台在焦面处上下各移动200nm，EMCCD记录下各处图像，再使用激光B长时间照射样品对荧光分子进行漂白，之后分别用激光A和激光B来激活和漂白其他的荧光分子，并进入下一个循环，当循环持续上百次后，得到样品内荧光分子在轴向的图像；
(c)将得到的图像进行高斯光强拟合，根据轴向高斯光强分布响应曲线进行曲线拟合，通过曲线拟合斜率计算得到荧光分子的精确位置。
2.一种轴向单分子高精度定位装置，包括激光器A、激光器B、物镜、三维样品位移台、轴向定位系统等；激光器A和激光器B用于对荧光分子的激发和激活。
3.根据权利要求2所述的一种轴向单分子高精度定位装置，其特征在于：激光器A和激光器B后在水平光路上依次安装有物镜、三维样品位移台。
4.根据权利要求2所述的一种轴向单分子高精度定位装置，其特征在于：轴向定位系统由分光棱镜、透镜和EMCCD组成，荧光进入轴向定位系统后，经透镜成像在EMCCD处。
5.根据权利要求2所述的一种轴向单分子高精度定位装置，其特征在于：EMCCD的位置相对焦点是对称的。
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