[发明专利]一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法

摘要

本发明公开了一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法，属于生物化工领域中的蛋白质层析分离技术。具体步骤如下：1)发酵液预处理，取含有人血白蛋白的酵母发酵液，离心去除酵母细胞，加入辛酸钠，加热，去除杂蛋白和灭活蛋白酶，离心分离，取上清液；2)柱层析，采用色氨酸为配基的混合模式介质，固定床层析分离上清液，上样pH值4.0～4.5，洗脱pH值7.0～9.0，收集洗脱峰。3)脱盐和干燥，将收集液脱盐，冷冻干燥，得到纯度大于95％的人血白蛋白。本发明的特色在于开发了一种新的分离工艺，可以从酵母发酵液中直接分离得到高纯度的人血白蛋白。方法的关键在于采用了以色氨酸为配基的混合模式介质，酵母发酵液无需调整离子强度，酸性条件下吸附，中性和弱碱性洗脱，具有洗脱条件温和、工艺简单、分离效率高、收率高的特点。

主权项

一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法，其特征在于包括如下步骤：1)取含有人血白蛋白的酵母发酵液，通过离心去除酵母细胞，调节pH至6.0，加入辛酸钠至5～20mM，68℃加热30min，用离心机以8000～10000rpm转速离心10～20min，取上清液，得到人血白蛋白粗品溶液；2)调节人血白蛋白粗品溶液的pH至4.0～4.5，用0.45μm滤膜过滤后，上样到填充有以色氨酸为配基的混合模式介质的层析柱中，平衡缓冲液冲洗，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰对应的洗脱缓冲液，得到人血白蛋白溶液；3)将人血白蛋白溶液脱盐，冷冻干燥，得到纯度大于95％的人血白蛋白；所述的混合模式介质为MX‑Trp‑650M，或者以酰胺键偶联色氨酸氨基作为配基的层析介质；所述的平衡缓冲液pH值为4.0～4.5；所述的洗脱缓冲液pH值为7.0～9.0。